3免疫球蛋白辩析.ppt

免疫球蛋白 基本概念 抗体（antibody, Ab）:B细胞受Ag刺激后增殖分化为浆细胞而产生的一种能与Ag特异性结合的蛋白质. 免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）: 具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白。 免疫球蛋白的存在形式： 膜型（membrane immunoglobulin, mIg） --- B细胞膜上的抗原受体； 分泌型(secreted immunoglobulin, sIg) ---分泌进入体液, 介导体液免疫应答。 Ig的性质 A 不耐热，60-700C被破坏。 B 能被多种蛋白酶水解。如胃蛋白酶、 木瓜蛋白酶。 C 可被中性盐沉淀。常用50%饱和硫酸 胺对Ab进行粗提。 第一节 Ig的结构 4 功能区及其功能 Ig分子每条肽连折叠成几个链内SS连接的球形结构。 IgG IgA IgD： L：VL CL H：VH CH1 CH2 CH3 IgM IgE ： … … … … CH4 功能： VL VH Ag结合部位 CH1 遗传标记区 CH2 补体结合部位 CH3 结合cell部位 IgM CH3为补体结合部位 CH4为结合cell部位 IgE CH2+CH3为结合cell部位 5．J链（joining chain） 浆细胞合成的15kD糖蛋白。作用：连接单体稳定多聚体。 6．分泌片（secretory piece） 上皮细胞合成的75kD糖蛋白。作用：保护SIgA避免被酶破坏。 7.Ig的水解片段 木瓜蛋白酶（papain）：在H链C区 SS处，N端裂解→3各片段。即两个Fab（fragment Ag binding和一个Fc（fragment crystallizable） 胃蛋白酶（pepsin）：H SS处，COOH端裂解→ PFc和 F（ab’）2 第 二 节  Ig的血清型 1、同种型（isotype） 同一种属所有个体的免疫球蛋白都具有的抗原特异性，其抗原决定簇主要存在于Ig的C区。 2、同种异型（allotype） 同一种属不同个体之间免疫球蛋白所具有的差异性，主要反映在分子的CH和CL上的一个或数个氨基酸的差异 (genetic markers--遗传标志) Gm因子：Gm1～30 Am因子：A2m1，A2m2 Em因子：Em1 Km因子：Km1，Km2，Km3 3、独特型（idiotype） 在同一个体内，不同B细胞克隆所产生的免疫球蛋白分子（每种特异性Ig分子）V区以及TCR、BCR的V区所具有的抗原特异性。 第三节 Ig的生物学功能 一 Ig V 识别并结合Ag 二 Ig C 区功能 激活补体 结合细胞Fc受体 通过胎盘和黏膜 结合SPA 三 免疫调节 一 IgV区识别并结合Ag 即V区的功能， 是Ab的CDR与Ag表位之间的结合。具有特异性，不同类Ig，结合价不同。 二 Ig C 区功能 2 结合细胞 Fc与细胞表面FcR结合→各种功能 1 调理作用。 2 ADCC作用 3 介导I型变态反应 3 通过胎盘和黏膜 IgG Fc与胎盘滋养层细胞表达的IgG运输蛋白（FcRn）结合，从而进入滋养层细胞内。 4 结合SPA 1 协同凝集实验。 2 标记技术中代替二抗。 五大类Ig特性和功能 第四节多克隆抗体和单克隆抗体 1.多克隆抗体（polyclonal antibody） 用复合抗原免疫动物而获得的免疫血清（由多个B细胞克隆产生）。 意义： （1）预防、治疗感染性疾病。 破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风 胎盘球蛋白 ? 抗病毒感染等 副作用：?超敏反应 （2）临床诊断，如：肥达氏反应 -- 伤寒 缺点：特异性差。 2 单克隆抗体 （ monoclonal antibody，mAb） 制备原理： 小鼠骨髓瘤能能无限增殖，但不产Ab，而免疫小鼠的脾细胞可产Ab却不能无限增殖，用此两种细胞进行融合，融合后在HAT中培养。可筛选出即产生抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞。将该细胞筛选后大量扩增，接种小鼠，可获