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植物组织培养课堂笔记第一章植物组织培养：在无菌或人工控制的条件下，利用适宜的培养基对离体的植物进行培养，使其再生成组织或完整的植株。过程：外植体 脱分化 愈伤组织 再分化 芽、根 植株名词解释：外植体：由植物上切割下来进行培养的器官、组织、细胞。愈伤组织：在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体的切面上产生。脱分化：已停止分裂的成熟细胞，转变为分生状态并形成愈伤组织的过程。再分化：脱分化组织再次分化形成具有特点结构和功能的组织的过程。培养基分类： 细胞培养：对植物体的单个细胞或小细胞团进行培养的方法。看护培养：同一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞来使其增值生长。用途是诱导形成单细胞系。 单细胞团 滤纸 活跃分生组织 培养基平板培养：将悬浮培养的细胞接种到一薄层固体培养基上进行培养的技术。 用途：分离得到单细胞无性系。操作：培养基冷却到35摄氏度时（尚未固化），将细胞悬浮液与培养基充分混合后倒入培养皿中（1mm左右）（水浴恒温35摄氏度）细胞直板率：能够分裂长出细胞团的细胞占接种细胞总数的百分率。悬浮培养：将游离的单细胞或细胞团按一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行液体培养。细胞全能性：（由强到弱）顶端分生组织 层间分生组织 侧生分生组织 薄壁组织 厚角组织 输导组织 厚壁组织植物细胞分裂能力分类： ①始终保持分裂能力：根尖，茎尖及形成层细胞。 ②永久失去分裂能力：筛管，导管，气孔保卫细胞 ③通常不分裂，但受到外界刺激可重新分裂：表皮细胞，薄壁细胞。第二章：培养基的成分和配制步骤：配培养基 取材 材料消毒 转接第一节、培养基成分（一）无机盐 大量元素（0.5mmol\L）:N P L Ca Mg S 微量元素：Fe B Mn Zn Mo Cu Co Cl （二）有机营养成分1、糖类：提供C源和能量（蔗糖，葡萄糖，果糖，蔗糖最常用）2、维生素：常用有Vc、B、B6、B12、烟酸、生物素3、氨基酸：常用的有甘氨酸，丝氨酸，酪氨酸(水解酪蛋白，水解乳蛋白也时常添加)（三）植物生长调节剂用量很少，但对外植体生长和分化起决定作用。影响最显著的是生长素和细胞分裂素。生长素类：种类：2,4-D：2,4-二氯笨氧乙酸 NAA： 萘乙酸 IAA;吲哚乙酸 IBA：吲哚丁酸 生根作用：诱导分生组织、胚状体产生、试管苗生根。2、细胞分裂素类：种类：KT：激动素（6-糠基氨基嘌呤） 6-BA：6-苄基氨基嘌呤 常用 ZT：玉米素 2-ip:2-异戊烯腺嘌呤KT功效强于6-BA，但6-BA市价便宜，用量较多作用：促进细胞分裂，由愈伤组织或器官分化出不定芽，促进芽的产生。3、生长素\细胞分裂素比值和绝对含量控制植物组织的形态发生。比值高 有利于根的形成适中 维持原生长不分化 生根细芽低 有利于芽的形成（四）天然有机添加剂常用种类浓度：椰子乳 10%酵母提取液物:0.5% 番茄汁：5%~10%香蕉泥100~200mg\L作用：提供微量营养成分，生理活性物质和生长素等。（5）琼脂：从海藻中提取，作凝固剂，不参与代谢。用量：0.6%~1.0%（6）活性炭：用量：0.1%~0.5%作用：吸附有害物质，使培养基变黑，有利于生根。二、培养基种类和选择不同植物、不同的培养部位和培养目的选择不同培养基建立一个新的培养体系时，一般由一种已被广泛采用的培养基开始。第二节、培养基的配制 母液 称量大量元素 微量元素 铁盐 有机物 生长调节剂 蔗糖 琼脂 加水加热溶解 混合、加水定容 调节ph值玻璃器皿 水洗 干燥 分装 封口 高压蒸汽灭菌 冷却备用1、配制母液的意义 提高工作效率，减小称量误差 （扩大10~100倍）2、母液配制原则： 相同类型的试剂混合； 易沉淀药品分开； 母液浓度要适当 认真计算和核量 准确称量3、配1升培养液用量=母液体积/扩大倍数4、微量元素母液： FeSO4与Na2-EDTA混合，形成络合物。其它微量元素分别溶解后混合定容为1瓶，扩大倍数为100倍。5、生长调节物质母液 不溶于水，先溶于助溶剂 NAA 、IAA、IBA、2、4-D、赤霉素、玉米素等，先溶于少量95%酒精，再加水定容。 KT和BA等，先溶于少量1mol\L盐酸中再加水定容。6、母液浓度：用量少，母液一般配制成0.1mg\L或1mg\L7、母液标签：注明母液名称，配制1L培养基时应取的数量。三、培养基的配制注意事项pH的调整：不同植物要求不同，多数为5.6~6.0 pH高低会影响培养基硬度，pH5.0，培养基不易凝固。 灭菌后，培养基的pH会降低0.2~0.3培养基的分装： 分装量：容器大小不一，约一指厚即可 注意：不要把培养基粘到瓶口上，以免染菌，封好瓶口，准备灭菌。四、培养基的灭菌和保存消毒：用物理和化学的方法杀死物体表面的