酶工程重点.docVIP

酶工程的主要研究内容酶的生产分离纯化酶的固定化酶及固定化酶的反应器酶与固定化酶的应用等内容①氧化还原酶类 ②转移酶类 ③水解酶类 ④裂合酶类 ⑤异构酶类 ⑥合成酶或连接酶类 酶的一级结构：指的是酶分子多肽链共价主链的氨基酸排列顺序。 酶的二级结构：指多肽链通过氢键排列成沿一维方向具有周期性结构的构象。 酶的三级结构：指单一的多肽链或共价连接的多肽链中所有的原子在空间上的排列，它是在二级结构的基础上，借助于各种次级键（非共价键），肽链进一步转曲、折叠和盘绕成具有特定肽链走向的紧密球状结构。 酶的必需基团：必需基团包括活性中心必需基团和活性中心外必需基团。其中活性中心必需基团包括结合基团和催化基团，结合基团具有结合酶和底物的作用，决定酶的专一性，催化基团具有催化酶和底物反应的作用，决定反应的催化性质。活性中心外必需基团具有维持酶具有活性的空间结构。⑴酸碱催化反应物分子与酸碱相接触，或吸附在催化剂固体表面一定的酸碱部位上，就会发生酸碱反应，形成活性中间络合物,然后再分解出产物,使催化剂复原。⑵共价催化在催化时亲核催化剂或亲电子催化剂分别放出电子或吸取电子并作用于底物的缺电子中心或负电子中心迅速形成不稳定的共价配合物降低反应的活化能以达到加速反应的目的⑶邻近效应与定向效应邻近效应就是底物的反应基团与酶的催化基团越靠近其反应速度越快定向效应是指反应物的反应基团之间酶的催化基团与底物的反应基团之间的正确取位后产生的反应速度增大的一种效应⑷扭曲变形和构象变化的催化效应⑸多元催化与协同效应⑹金属离子催化⑺微环境的影响Vmax Km 竞争性抑制 不变 增加 反竞争性抑制 减小 减小 非竞争性抑制 减小 不变 酶抑制作用类型：不可逆抑制、可逆抑制 不可逆抑制剂：是指抑制剂与酶的活性中心发生了化学反应，抑制剂共价的连接到酶分子中的必须基团上，阻碍了底物与酶的结合或破坏了酶的催化基团。 可逆抑制：指的是抑制剂与酶之间是以非共价键发生相互作用，其结合是建立在解离平衡的基础上，未涉及化学反应，因此，可以通过透析等方法除去抑制剂，从而减轻或消除抑制作用。可逆的抑制作用分为竞争性的和非竞争性的抑制作用。 Ks型专一性不可逆抑制：也称亲和标记，指结构与底物类似但同时带有一个活泼化学基团的Ks型专一性不可逆抑制剂或亲和标记试剂对酶分子必需基团的某一个侧链进行共价修饰，从而抑制酶的活性。 Kcat型不可逆抑制：也称“自杀性抑制剂”， 也是底物的类似物，但其结构中潜在着一种活性基团，在酶的作用下被激活，与酶的活性中心发生共价结合，使酶失活。每一种自杀底物都是酶的作用对象，这是一种专一性很高的不可逆抑制剂。 固定化酶：是指在一定空间内呈闭锁状态存在的酶，能连续的进行反应，反应后的酶可以回收重复使用。(书) 固定化酶：是通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚在一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶充分发挥催化作用。 优点：①极易将固定化酶与底物、产物分开 ②可以在较长时间内进行反复分批反应和装柱连续反应 ③在大多数情况下，能够提高酶的稳定性 ④酶反应过程能够加以严格控制 ⑤产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺 ⑥较游离酶更适合于多酶反应 ⑦可以增加产物的收率，提高产物的质量 ⑧酶的使用效率提高，成本降低? 缺点：①固定化时，酶活力有损失 ②增加了生产的成本，工厂初始投资大 ③只能用于可溶性底物，而且较适用于小分子底物，对大分子底物不适宜 ④与完整菌体相比不适宜于多酶反应，特别是需要辅助因子的反应 ⑤胞内酶必须经过酶的分离程序 固定化方法 分类 非化学结合法 结晶法 分散法 物理吸附法 离子结合法 化学结合法 交联法 共价结合法 包埋法 微囊法 网格法 吸附法 吸附法制备固定化酶操作简单，可充分选择不同电荷、不同形状的载体，吸附过程可以同时纯化酶，固定化酶在使用过程失活后可重新活化，同时，载体可以回收再利用；同时，此法固定化酶酶易脱落，影响产物纯度和酶操作的稳定性。 包埋法 包埋法操作简单，可以制的较高活力的固定化酶，对大多数酶、粗酶制剂甚至完整的微生物细胞都是使用的。但是，只有小分子底物和底物可以通过凝胶网络，而对大分子不适宜，同时导致酶的活力降低。 共价键结合法 酶与载体结合牢固，酶不易脱落，但反应条件较激烈，酶易失活，同时，制作手续亦较繁琐。 交联法 操作简单，酶的固定化程度好；但是交联反应过于激烈，许多酶固定化过程中失效，回收率不高。 立体屏蔽：是指由于固定化过程所用的载体的孔径太小，或者是由于固定化的方式与位置不当，给酶的活性中心或/和调解中心造成了空间障碍，使底物与效应物等无法直接和酶接触，从而影响了酶活性的一种效应。 本征速率：一般将考虑到固定化后酶分子的结构改变、底物