LC-MS-MS测定牛奶中三聚氰胺残留量的归档1.docVIP

LC-MS-MS测定牛奶中三聚氰胺残留量的 不确定度评定 制 定 审核 批 准 LC-MS-MS测定牛奶 中三聚氰胺残留量的 不确定度评定 文件编号 WJKF-P-Ⅱ-062 版本编号 A 制定时间 修改时间 概述 本试验采用《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法(GB/T 22388-2008)测定牛奶中三聚氰胺残留量。 通过对影响测定结果的不确定度分量的分析和量化，求出被测定的标准不确定度和扩展不确定度，给出各分量对测定结果不确定度的相对贡献，对测定结果进行了表述。 实验部分 仪器检测仪器：测试过程 称取g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入 mL 1％三氯乙酸溶液和mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min后，以000 r/min离心10 min。上清液。 转移至阳离子交换固相萃取柱中。依次用3 mL水和3 mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6 mL氨化甲醇溶液（5 mL 氨水95 mL 甲醇）洗脱流速不超过1 mL/min。洗脱液于50下用氮气吹干，残留物用1 mL流动相定容，涡旋过0.2 μm微孔滤膜，供LC-MS/MS测定。 2μL注入LC-MS-MS,以峰面积法制作标准曲线。根据5点标准曲线法，求得三聚氰胺的残留含量。 测定程序见图1： 本测试采用(1000.0 ±0.0051)μg/mL的农药标准储备液配制成五种浓度的标准品工作液,每种溶液均用LC-MS-MS测定两次,得到相应的峰面积,用最小二乘法拟合浓度- 峰面积曲线进行校准。 数学模型 根据上述测定方法,可知与牛奶中三聚氰胺残留量有关的量值分别为,样品称样量,样品初分散体积,提取液分取净化体积,最终样液体积及方法的回收率。分析各影响因素与牛奶中三聚氰胺残留量的乘除关系,可得其测量数学模型为: LC-MS-MS测定牛奶 中三聚氰胺残留量的 不确定度评定 文件编号 WJKF-P-Ⅱ-062 版本编号 A 制定时间 修改时间 式中：W为试样中三聚氰胺的残留量,μg/g; C为定容液中三聚氰胺的浓度,μg/mL; V为定容体积，mL; frec为回收率校正因子,等于回收率的倒数。 fhom为均匀性因子; frep为重复性因子; m为样品质量, g. 不确定度分量的主要来源 校准过程引入的不确定度 包括由5点标准品工作液的浓度- 峰面积拟合的直线求得定容液浓度C时所引入的不确定度和标准储备液稀释成标准品工作液所引入的不确定度 。 样品质量引入的不确定度 由天平的最大允许误差（MPE）构成。 体积引入的不确定度 由体积量取器具的校准不确定度和其校准温度和使用温度不同导致的不确定度组成。 制样过程引入的不确定度 测试样品的制备过程非常复杂,需经过提取、净化、浓缩等步骤,每一步操作都会引入不确定度,要逐步确定每一步骤对测量结果不确定度的贡献是相当困难的,可采用检测方法确认中的有关数据(如回收率) ,对制样过程引入的不确定度进行评定。 测试过程随机效应导致的不确定度 包括样品的均匀性和代表性,天平的重复性,体积刻度充满的重复性,制样过程中净化、浓缩等各步骤的重复性,进样的重复性等因素引入的不确定度。 不确定度分量来源见图2。 LC-MS-MS测定牛奶 中三聚氰胺残留量的 不确定度评定 文件编号 WJKF-P-Ⅱ-062 版本编号 A 制定时间 修改时间 不确定度分量的评定 5.1 校准过程引入的不确定度 5.1.1 标准物质引入的不确定度 标准储备液的不确定度 本方法中使用的是三聚氰胺标准品。标准储备液的配制是称取10mg标准品溶解于10 mL容量瓶中，浓度为1000μg/mL. ① 标准品纯度的不确定度。 购自xStandard的三聚氰胺纯度为99.5%，可以认为其允许误差为0.5%，，按照均匀分布处理，其标准不确定度和相对标准不确定度分别为： ② 标准品称量的不确定度。 用精确至0.1mg的电子天平称取10.0mg三聚氰胺标准品，不确定度主要由天平校准、环境、称量的变动性（随机性）所产生。通常情况下忽略环境因素的影响，而称量变动性（随机性）所带来的不确定度以在方法重复性中予以评定，故在此不予重复评定。评定过程中所引入的独立不确定度分量来自于天平的校准。所用天平的最大允许误差为0.05 mg，两次称量（减重法）引入的标准不确定度属B类不确定度，按均匀分布处理为：