第五章 酶.ppt

根据酶对其底物结构选择的严格程度不同，酶的特异性可大致分为以下3种类型： 绝对特异性(absolute specificity)：只能作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物 。 相对特异性(relative specificity)：作用于一类化合物或一种化学键。 立体结构特异性(stereo specificity)：作用于立体异构体中的一种。 LDH同工酶的生理功能 各种蛋白酶的激活 绝对特异性 　　酶只作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物 。 　　如： 胰凝乳蛋白酶的作用机理 胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）EC3.4.4.5 的活性中心 米氏方程式的推导 米氏方程的推导： 米氏方程式 Km--米氏常数（Michaelis-Menton constant） 表明当已知Km和Vmax时，酶反应速率与底物浓度的定量关系。 Km的物理意义 Km值是当酶反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 单位是底物浓度的单位，一般用mol/L或mmol／L表示。 计算：底物浓度—反应速度 底物浓度较低时， [S]《 Km，米氏方程式的分母中[S]一项可以忽略不计，得： 反应速度与底物浓度成正比， 符合一级反应。 在底物浓度很高时，[S]》Km，米氏方程中，Km可以忽略不计，得 反应速度与底物浓度无关， 符合零级反应——测定酶活力 1.3米氏常数的意义 ① Km是酶的一个特征常数。 Km的大小只与酶的性质有关，而与酶浓度无关。 鉴别酶：25℃，最适pH的Km值 ② Km可以判断酶的专一性和天然底物。 酶的最适底物或天然底物： Km值最小的底物 酶对底物亲和力的大小：1/ Km 最适底物的亲和力（1/ Km）最大， Km最小,达最大反应速率一半时所需要的底物浓度愈小。 1、巯基酶抑制剂 2、羟基酶抑制 可逆性抑制作用 概念：抑制剂与酶非共价结合，可用透析、 超滤等方法除去 类型：竞争性抑制作用 非竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 磺胺类药物的竞争性抑制——二氢叶酸合成酶 磺胺类药物的抑菌机理 由于效应物的存在，而引起酶的结构（构象）变化。 别构酶(Allosteric enzyme)的特点： 一般是寡聚酶，由多亚基组成，包括催化部位和调节（别构）部位； 具有别构效应。指酶和一个配体（底物，调节物）结合后可以影响酶和另一个配体（底物）的结合能力。 别构酶与非调节酶动力学曲线的比较 别构酶举例：天冬氨酸转氨甲酰酶，简称ATCase 酪氨酸酶缺陷——白化病 苯丙氨酸羟化酶缺陷——苯丙酮酸尿症 胱硫醚合成酶缺陷——同型胱氨酸尿症 根据中间产物学说，酶促反应分两步进行: 3. 米氏常数的意义及测定 v = Vmax/2， 则： km= [S] 意义： （1） km是酶的一个基本的特征常数。其大小与酶的浓度无关，而与具体的底物有关，且随着温度、pH和离子强度而改变。 （2）从km可判断酶的专一性和天然底物。 Km最小的底物，通常就是该酶的最适底物，也就是天然底物。 （3）当k2＞＞k3时， km的大小可以表示酶与底物的亲和性。 ∵ km= （k2 +k3)/k1 Km ≈ k2 / k1 S + E ES E + P ∴ km可以看作ES的解离常数ks ： km= ks = ———— [S][E] [ES] 当km大，说明ES容易解离，酶与底物结合的亲和力小。 （5）km还可以推断某一代谢物在体内可能的代谢途径。 丙酮酸 乳酸 乙酰CoA 乙醛 乳酸脱氢酶（1.7×10-5） 丙酮酸脱氢酶（1.3×10-3） 丙酮酸脱羧酶（1.0×10-3） 当丙酮酸浓度较低时，代谢走哪条途径决定于km最小的酶。 米氏常数可根据实验数据作图法直接求得：先测定不同底物浓度的反应初速度，从v与[S]的关系曲线求得V，然后再从1/2V求得相应的[S]即为km（近似值）。 通常用Lineweaver-Burk作图法（双倒数作图法） —— 1 v = —— km V · —— [S] 1 + —— V 1 （y