第三节动物细胞工程.docVIP

第三节 动物细胞工程 【学习目标】 1、简述动物细胞培养的过程、条件及其应用 2、简述克隆动物的概念含义和基本原理 3、简述体细胞核移植技术和动物克隆技术，以及应用前景 4、简述动物细胞融合的方法和过程 5、简述单克隆抗体的制备过程及其应用 【课前预习】 一、动物细胞与组织培养 1、概念：是指在体外模拟动物体内环境，将动物的 在 的条件下培养，使其继续生长、增殖并维持原有结构和功能的技术。 2、条件：动物细胞培养的环境条件，包括 ； 动物细胞与组织培养的培养基，可分为 和 。 动物细胞与组织培养的细胞，一般为 、 或 。 二、细胞核移植与动物体细胞克隆 动物体细胞克隆：是将供体体细胞的 与受体 进行人工组合，借助于 的发育能力，经过培养发育成胚胎进而形成个体的技术。 细胞核移植技术：是一种利用显微操作技术将某种动物细胞的 移入 或 动物的 内的技术。 三、细胞融合和单克隆抗体 1、细胞融合概念：是指在一定的条件下将 细胞融合为 的过程。 2、诱导细胞融合的方法有： 法（如 ）、 法（如 ）；和 法（如 ）。 3、单克隆抗体制备：给小鼠注射特定的 ，从 中分离B淋巴细胞（即浆细胞）与 细胞融合，经培养，筛选出 细胞，使其在 或 培养，迅速增殖，分泌出 ，即为单克隆抗体。 【共同探究】 一、动物细胞与组织培养 1、概念： 2、动物细胞培养的过程： 【思考题1】为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养，也可以用细胞群（团）、组织块培养，经传代培养后，最终都为细胞培养。分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因此，这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。同时，分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术得以实现。 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 3、动物组织培养的过程： 【思考题2】动物组织培养与动物细胞培养的过程有何不同？ 【思考题3】幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？ 细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。 【思考题4】动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？ 植物的任何一部分，甚至单个细胞都具有长成完整植株的能力。但要发育成完整植株，必须先脱分化，脱分化的细胞具有发育成任何组织的能力，然后进行再分化，形成完整植株。 一般而言，动物细胞培养不需要经过脱分化过程，因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完成个体的能力。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 【小知识】细胞贴壁、细胞的接触抑制 将细胞悬浮液置于适宜环境的培养瓶中培养，悬液中分散的细胞很快贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 4、动物细胞培养的条件： ①对培养液和所有培养用具进行无菌处理。（为什么？） ②营