活菌微生态制剂对黄曲霉真菌的生长抑制和拮抗研究.docVIP

微生态制剂对黄曲霉真菌的生长抑制和拮抗研究 【摘要】：黄曲霉及其毒素危害巨大，是饲料食品中的主要污染源之一。乳酸菌作为益生菌，在食品防霉去毒的方法已获得应用，这是运用生物控制的一个成功范例；芽孢杆菌也已经可以从海洋生物中提取并应用于抑制黄曲霉真菌的生长；黑曲霉因为具有良好的分泌多种降解酶的能力，并且生产的酶制剂、有安全、可靠、不产生毒素的特点，是公认安全(GRAS)的微生物，也是科技工作者用生物控制方法来降解黄曲霉毒素的一种有效微生物。 【关键词】：微生态、中药、益生素、发酵、黄曲霉真菌 乳酸菌 芽孢杆菌 黑曲霉 生长抑制 霉菌毒素污染造成全世界每年粮食的损失达数千亿美元，而黄曲霉毒素因其对人、畜肝脏的剧烈损害而名列毒性之首，被列为极毒。黄曲霉菌( Aspergillus flavus) 产生的黄曲霉毒素( aflatoxin)是目前发现的毒性和致癌性最强的化学物质之一，被世界卫生组织认定为1A 级危险物( WHO，1993)。黄曲霉毒素( AFT) 主要是粮油食品上常出现的黄曲霉( Aspergilluflavas Link ) 和寄生曲( Aspergillus ParasiticasSpeave) 产生的种具活性的、有毒的次级代谢产物。黄曲霉可通过产生孢子进行传播，侵染植物、植物产品各种食品和饲料等。它对农作物的产量，人、兽和禽类的健康构成很大威胁。凡是含淀粉多的食品，如玉米、花生、大豆、大米、小麦、面粉等最易受到黄曲霉及其毒素的污染，果仁类也常受污染。因此采取何种措施来预防黄曲霉的生长与产毒是根本措施。目前的防霉措施是利用良好的农业生产工艺从田间防霉，，，，，，， ， ， ， ( 3000 r/min， 20 min) 1 mL PDA 培养基， ， 20 μL 黄曲霉孢子悬液( 1×10^7 cfu/mL) ，PDA 培养基为对照组， 20 μL 黄曲霉孢子悬液， 28 4d，， (%) =( 对照组菌落直径- 试验组菌落直径) /对照组菌落直径×100。每个处理设3 个重复组， 3 次， 3 次试验结果平均值进行分析。 1.2 对黄曲霉孢子萌发影响试验： 设2 个处理组和2 个对照组。处理1： 将1 mL 乳酸杆菌培养液( 1×10^9 cfu/mL) 和50μL 黄曲霉孢子悬液( 1×10^5 cfu/mL) 同时接种到5mL 新鲜MRS 液体培养基中。处理2: 将0.5 mL黄曲霉孢子悬液( 1×10^5 cfu/mL) 加入到5 mL 乳酸杆菌培养液中( 1×10^9 cfu/mL) 。对照组1: 用乳酸调MRS 肉汤与乳酸杆菌培养液pH 相同， 500 μL 和50 μL 黄曲霉孢子悬液分别接种到调好pH 值的MRS 肉汤中， 2: 将500 μL 和50 μL 黄曲霉孢子悬液分别接种到空白的MRS 肉汤中， pH 值。2 个处理组和2 个对照组均在28 ℃培养， 6、18、24 h 取不同处理组0.1 mL 涂布PDA 平板， 28 5 d， 2 的生长率为100 %， 1 的抑制率， : 抑制率(%) =[对照组2 孢子萌发数- ( 处理组或对照组1 孢子萌发数) /对照组2 孢子萌发数]×100。 1.3 霉菌生长抑制试验结果：本试验中， B30 以及牛源乳酸杆菌BN3 是对黄曲霉菌生长有明显抑制作用的乳酸杆菌。由表1 可见，， BN3 B30 在培养48 h 后， BN3 上清液抑菌效果不佳外， ， ， ， ， ， 2。从表2 可以看出， BN3 和B30对孢子的萌发均起到了抑制的作用，并且在孢子与乳酸杆菌共同培养6 h 就出现了抑菌现象。与MRS 空白对照组相比， pH 值后， pH 环境同样会作用于孢子， ， 18 h 的抑制作用高于6 h 和24 h。处理组1 与处理组2相比， 2 的抑菌效果更好， BN3 和B30对黄曲霉孢子萌发的抑制作用 注: G1 为处理组1， G2 2; CK1 为对照组1。 1.5 结果分析： 1.5.1 在对黄曲霉生长抑制试验中：发现乳酸杆菌全菌液的抑制效果比乳酸杆菌上清液更好。其原因可能是，除乳酸杆菌全菌液中本身含乳酸和一些抑菌代谢产物形成抑菌现象外， PDA 培养基中后与霉菌间产生了多因素拮抗作用，故比乳酸杆菌离心上清液的抑霉菌效果好。 1.5.2 乳酸杆菌对孢子萌发影响试验结果显示：处理组1 与处理组2 相比， 处理组2 的抑菌效果更好， 1 高出近4 倍， ， ， pH值降低， pH 环境有降低黄曲霉孢子萌发率的作用， pH 环境的影响， 1 株抑制黄曲霉活性高的微生物，利用16SrDNA 特异性扩增技术对其菌种进行鉴定, 并研究其对黄曲霉菌丝延长、孢子萌发和毒素合成的影响，用Beac