动物细胞培养资料.ppt

温故知新 大规模培养生产蛋白质生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 获得大量自体的皮肤细胞，解决烧伤病人的植皮问题 检测有毒物质，判断某种物质的细胞毒性 筛选抗癌药物，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 * * 第二节 动物细胞工程 ？ ？ ？ ？ 再分化 ？ 植物细胞杂交技术利用什么原理？ 用什么方法可以诱导植物细胞融合？ 一、原理： 细胞膜具有流动性 细胞的全能性 二、诱导方式： 物理法、化学法 植物细胞杂交技术最终获得什么？ 三、用途： 获得杂种植株 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 细胞核移植 动物细胞工程技术 一、动物细胞培养 （一）概念 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，放在适当的培养基中，使之生长和增殖的技术。 目的 获得细胞或细胞产物； 原理 细胞增殖 不能类似植物组织培养获得完整动物个体。 动物 组织块 剪碎 胰蛋白酶 单个 细胞 加培养液 制成 细胞 悬浮液 （二）过程 细胞贴壁 原代培养 脱离、分瓶 传代培养 接触抑制 细胞群 动物 组织块 剪碎 胰蛋白酶 单个 细胞 加培养液 制成 细胞 悬浮液 10—50 代细胞 （二）过程 细胞贴壁 原代培养 脱离、分瓶 传代培养 少部分细胞突破细胞寿限，获得不死性 细胞群 细胞株 细胞系 接触抑制 分离组织 分散组织 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 （二）过程 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 无限增殖 保持细胞正常二 倍体核型 部分细胞核型改变 遗传物质改变突破细胞寿限 细胞株 细胞系 问题1 动物细胞培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的细胞分散过程。 [来源:Zxxk.Com] 问题2 胰蛋白酶会把细胞分解掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以分解细胞间的蛋白外，长时间的作用也会分解细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的作用时间。 问题3 体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 问题4 体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ （三）动物细胞培养的条件 1. 无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素，定期更换培养液。 2. 营养物质 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素以及动物血清等。 合成培养基：将细胞所需的各种营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基。 问题5 为什么对动物细胞进行培养时要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。有些氨基酸是必需氨基酸，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子；血清还含有多种未知的促细胞生长因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。 提供细胞生长增殖所需的激素，生长因子。 3. 温度和pH 温度 pH 4. 气体环境 与体内相近 36.5±0.5℃ 7.2~7.4 O2 CO2 细胞代谢所必需 维持pH CO2培养箱（95% 空气＋5% CO2 ） （四）动物细胞培养技术的应用 * *