动物细胞核的分离与鉴定资料.ppt

动物细胞核的分离与鉴定 赵麒麟：0910150434 张耀镭：0910150441 邓江岳：0910150436 黄小江：0910150440 黄 华：0910150423 2009级临床4班 1956年由Chauveau等人提出，用高密度介质来分离细胞核，由于细胞核密度较大，在高密度介质中，在高速离心的条件下沉降下来，从而达到细胞核与细胞质的分离。 本次实验就是各种细胞器在一定介质中沉降速度的差异，用离心的方法将细胞核分离出来 细胞核-----线粒体-------溶酶体和其他微体 用柠檬酸分离细胞核，在柠檬酸介质中可以显著除去附着在细胞核膜上的细胞质成分，由于柠檬酸降低了溶质的pH，这样可减少细胞核的破碎率。 解剖器材1套 高速捣碎机/组织匀浆器1台 普通离心机1台 天平1台 普通光学显微镜1台 0.9%生理盐水 1.5柠檬酸钠 （0.25mol/L+1.5%）蔗糖+柠檬酸钠溶液 （0.88mol/L+1.5%)蔗糖+柠檬酸钠溶液 1%甲苯胺蓝 1.实验前24小时小动物须保持空腹，然后将其断头处死，取出肝脏，在生理盐水充分洗去血污，用滤纸洗吸取表面液体，肝脏保存待用。 2.取1g肝脏剪成小块，按1：10（重量：体积）加入1.5%柠檬酸钠溶液，用组织捣碎机（组织匀浆器）破碎细胞（注意保护细胞核）。 3.把捣碎液用8层纱布（先用少量生理盐水润洗纱布）过滤，绿叶以800ymp/min离心15分钟，弃上清液，沉淀再用1.5%柠檬酸钠液洗一次。 4.将沉淀再悬浮于10ml0.25mol/L蔗糖+1.5%柠檬酸溶液制成悬液，将离心管预先加好20ml0.88mol/L蔗糖+1.5%柠檬酸液，并将上述悬液置于0.88mol/L+1.5%柠檬酸溶液，以1000rmp/min离心10分钟。 5.取上清液制成涂片①，沉淀制成涂片②，自然干燥后分别滴加甲苯胺蓝染液，染色5~7分钟。 6.洗涤，晾干，镜检，描述结果 取动物肝脏洗涤待用 取1g肝脏按1：10加入 柠檬酸钠溶液，捣碎 过滤，8000rmp/L离心15分钟，弃上清液再用1.5%柠檬酸钠再洗一次 沉淀加10ml0.25mol/L蔗糖+1.5%柠檬酸溶液制成悬液 20ml0.88mol/L蔗糖+1.5%柠檬酸液，并将上述悬液置于0.88mol/L+1.5%柠檬酸溶液，以1000rmp/min离心10分钟。 制涂片①②，染色，镜检 组织块必须完全捣碎，过滤必须将没有捣碎的沉渣滤渣，操作必须严格按照实验步骤进行。