色谱问题解答.docVIP

1.流动相： 流动相首选甲醇-水，其比例根据被测药物的极性而定，被测药物的极性小则70％甲醇先试，被测药物的极性大，则30％甲醇先试，被测药物的极性中等，则50％甲醇先试，当然还要根据药物结构的不同，选用一些添加剂和缓冲盐等。色谱柱：柱子以ODS柱，即C18为通用。被测药物的极性小，可用C8或氰基柱等，被测药物的极性大，则可选用氨基柱或能用纯水洗的改性柱。检测波长：如果所测药物不是在近UV区215nm，波长只要能满足检测需要，应以靠长波方向及不是坡度太大之处为宜，这是药品分析与生物分析的不同之处。匆此。 我再补充些:流动相:还 可通过调节缓冲液的PH来改善峰型,如酸性的药物可加入适当的酸如磷酸、乙酸等,碱性药物可加入适当的碱如三乙胺等柱：同时还要考虑不同柱之间的差异，同样ODS或C8会有不同的适合范围，可看柱说明书。波长：当然还要考虑杂质的吸收，测含量可照上。由于在反相色谱中，极性大的先出峰，所以可减小有机相来增加RT回应：我想请教安捷仑1100色谱仪B泵的泵头压力(PURGR压力)比A泵的高30BAR(使用用一溶剂情况下),咋回事? 你可以检查一下A、B各流路的管道、泵或者滤头等是否有堵塞的问题，也许是某个地方脏了。问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响？答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：1． 提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。2． 玻璃的惰性不不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。3． 易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。4． 可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么？答:1． 进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。2． 进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。3． 在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。4． 系统的进样垫、柱接头等地方漏气。问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法答: 1． 样品量不足，解决办法为增加样品量2． 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3． 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器4． 检测器衰减太多。调整衰减即可。5． 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数6． 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。7． 检测池中有气泡。解决办法为排气。8． 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。9． 流动相流量不合适。调整流速即可。10． 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？答：原因可能有：1． 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；2． 比例阀失效，更换比例阀即可；3． 泵密封垫损坏，更换密封垫即可；4． 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；5． 系统检漏，找出漏点，密封即可；6． 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。问：做PGS/MS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱？答：聚合物，尤其是一些含氮，硫及卤素的高分子裂解时，常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降，可采用保护预柱，即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱，通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内，预柱可置于GC气化室内，这样既容易控制温度，又减少系统的死体积，当然，预柱填料需经常更换。问：我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？答：这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。问：我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？答：柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。1． 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2． 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降