肝毒性论文酶组化法和生化法在药物安评中的效果比较及盐酸雷诺嗪遗传毒性研究.doc

肝毒性论文：酶组化法和生化法在药物安评中的效果比较及盐酸雷诺嗪遗传毒性研究 【中文摘要】药物毒性是导致药物研发失败的主要原因之一。为了避免在药物开发晚期发现毒性导致的昂贵代价,尽早确定药物潜在的毒性问题非常重要。在药物毒性中,以肝和肾毒性最为重要。肝脏是生物转化和解毒的主要场所,也是毒性损伤的易感靶器官之一。据报道,药源性肝病或肝损伤在药物不良反应中占10%-15%。因此药物毒性的早期发现对药物研发就显得至关重要。本课题旨在实验研究基础上,以Beagle犬作为模型,以低分量褐藻多糖硫酸酯(LowMolecular Weight Fucoidan, LMWF)为研究对象,采用不同的检测方法,检测肝脏敏感指标的变化,对毒性早期反应进行判断,分析药物产生毒性的可能性,提高重要脏器敏感指标预测毒性的准确性。1.酶组化法和生化法在药物安评中的效果比较观察LMWF对Beagle犬肝脏血清生化及酶组织化学的影响。方法(1)动物分组和给药：取健康Beagle犬16只,♀♂各半,按体重随机分为溶媒对照组(Veh)、LMWF低(L,200 mg/kg/d)、中(M,800 mg/kg/d)、高(H,3000 mg/kg/d)剂量组,每组4只。采用灌胃给药方式,每天上午给药1次,连续给药6d后,停药1 d。按此方式,共计给药13 wk。(2)指标检测：每天进行一般症状观察,每周测定体重1次；检测第一次给药前及末次给药后的动物血清生化指标；末次给药后,取肝脏称重,计算脏器系数；在肝脏相同位置取1cm3大小组织,放入液氮速冻,切片、染色,进行酶组织化学检测；剩余肝脏用4%中性甲醛溶液固定,石蜡包埋后切片,HE染色,光学显微镜检查。结果(1)一般症状:LMWF各剂量组与Veh组动物于给药前和试验阶段均未出现异常症状,动物活动状态良好,饮食、饮水正常。(2)体重：试验结果表明,在给药期间,LMWF不同剂量组动物的体重与Veh组比较,未见明显改变(P0.05)。(3)血清生化学检测：给药前和给药结束,LMWF给药各组动物的相关血清生化指标与Veh组比较,无统计学差异(P0.05)。(4)病理学检测：各给药组动物的肝脏湿重和脏器系数与Veh组比较,未见明显变化(P0.05)；光学显微镜观察结果显示,各给药组动物肝脏的组织形态并未发现明显病变。(5)肝脏ATPase(adenosine triphosphatase, ATPase)和SDH(Succinate dehydrogenase, SDH)无论是定性观察还是定量分析,3000mg/kg/d给药酶活性下降明显,与Veh组比较,有统计学意义(P0.05),且无剂量反应关系；盐酸雷诺嗪在55～222mg/kg剂量范围内,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核数及小鼠精子畸变率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论盐酸雷诺嗪在所测剂量范围内,未显示遗传毒性作用。 【英文摘要】Drug toxicity is one of the main causes leading to failure of drug development. In order to decrease high cost from the drug researches and developments, it is very important to make certain the potential toxicity of drugs in early state of drug developments. The toxicity of livers and kidneys is the most important in the drug toxicities. The liver is not only the main site of biotransformations and detoxification but also the sensitive target organ of the drug toxicity. It is reported that drug-induced liver disease or liver damage in adverse drug reactions accounted for 10%-15% [1].Therefore, the early detection of drug toxicities is crucial for drug development. In the present study, Beagle dogs were used as a model, and Low Molecular Weight Fucoidan(LMWF) was conduct