贺氏三通法对IL18和IL1含量的影响.doc

“贺氏三通法”对脑缺血再灌注模型大鼠血清IL-18和IL-1水平的影响( 程金莲1 张露芬2 王麟鹏1 牛晓暐1 李敬道1 宣雅波1 *国家中医药管理局“中医临床诊疗技术整理与研究项目”（2000ZL03） 作者单位：1.100010，首都医科大学附属北京中医医院针灸科 2.100029，北京中医药大学针灸学院综合实验室 [摘要] 目的：观察“贺氏三通法”对脑缺血再灌注模型大鼠血清白细胞介素-18（IL-18）及白细胞介素-1（IL-1）水平的影响。方法：将SD成年雄性大鼠随机分为假手术组（8只）、模型对照组（8只）、针刺组（24只）、药物组（16只）。采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型。造模成功后，针刺组分别于3 h、6 h、48 h（每时段8只）予“贺氏三通法”针刺，药物组于5 h、48 h予香丹注射液腹腔内注射。模型制备成功后72 h取材，采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清IL-18，放射免疫法检测血清IL-1含量。结果：模型对照组IL-18和IL-1水平较假手术组明显增高，差异有统计学意义（均P0.01）；48h针刺组IL-18水平较模型对照组明显降低，差异有统计学意义（P0.05）；6h、48h针刺组IL-1水平均较模型对照组降低，差异有统计学意义（均P 0.01）；针刺组与相应时间介入的药物对照组比较均无显著差异（p0.05）。结论：“贺氏三通法”可改善脑缺血再灌注后血清IL-18和IL-1水平，提示“贺氏三通法”可能通过调节IL-1、IL-18的紊乱，参与对脑缺血再灌注脑损伤的保护机制。 [关键词] 贺氏三通法；针灸；脑缺血再灌注；血清IL-18；血清IL-1；实验研究 Effect of Acupuncture at “He’santong Method” with Different Stimulation Time on Serum Interleukin-18 and Interleukin-1 Contents in Cerebral Ischmia Reperfusion Injury rats “贺氏三通法”是贺普仁教授在50多年的医疗实践中，以“病多气滞”的病机学说和“法用三通”针灸治则为基础创立的针灸治疗体系，应用于缺血性脑卒中各期疗效显著[1][2]。本研究通过脑缺血再灌注模型大鼠，观察不同时间针刺对血清白细胞介素-18（IL-18）及白细胞介素-1（IL-1）含量的影响，研究IL-18在针灸抗炎免疫方面的调节作用，探讨“贺氏三通法”对缺血性脑卒中的作用机制。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物与分组：SD成年雄性大鼠，清洁级，体重210-240 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SYXK（京）2006-0012。饲养于北京中医药大学针灸学院综合实验室动物房，动物房符合SPF屏障系统。采取随机抽签的方法分为假手术组（8只）、模型对照组（8只）、针刺组（24只）、药物组（16只）。根据干预时间的不同，针刺组中分为3 h针刺组h针刺组h针刺组h药物组h药物组IL-18定量EIA试剂盒购于上海西唐生物科技有限公司，IL-1放免测定试剂盒购自北京华英生物技术研究所。 1.2.4 仪器设备：低温离心机（ZK 380型，德国产）、全自动酶标仪（Multiskan MK3型，芬兰产）、γ射线计数仪（GC-911型，中国科技大学仪器厂） 1.2 方法 1.2.1 模型制备：参照Zea longa线拴法[3]制备模型。模型成功的标准：（1）对侧Hornor征，（2）提尾时对侧前肢内收屈曲，（3）爬行时向对侧倾倒或按顺时针方向转圈。模型不成功者均被剔除，随机补充，保证每组8只。 1.2.2 实验方法：模型对照组造模后不予处理；针刺组组h、6h针刺组h、6h针刺组h针刺组.3. 指标检测 1.3.1 标本采集：各组大鼠均在造模成功72h后行断头取血5mL，室温放置100 min，-4℃离心3000r/min 15min，分离血清，-70℃保存。 1.3.2 指标检测：采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清IL-18，采用放射免疫法测定血清IL-1含量。 1.4 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件，计量资料采用均数±标准差（）表示，各组组间差异采用单因素方差分析，以P0.05作为具有显著性差异的标准。 2 结果 2.1 各组大鼠血清IL-18水平比较 模型对照组IL-18水平较假手术组明显增高，差异有统计学意义（P0.01）。3h、6h针刺组和5 h药物组的IL-18水平均不同程度低于模型对照组，差异无统计学意义（均P0.05），48h针刺组IL-18水平较模型对照组明显降低，差异有统计学意义（P0.05），48 h药物组有降低趋势，差异