土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案(完美修改).doc

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、研究思路 1、筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 分解成 之后，才能被植物吸收利用。 （4）以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是： ① ；② 。 （5）PCR（ ）是一种在体外将 。此项技术的自动化，但是在合成的过程中需要在93℃的条件下，所以要求使用耐高温的 2、统计菌落数目 （1）测定微生物数量的常用方法有 和 。 （2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置 个平板，选择菌落数在 的平板进行计数，并取 。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 3、设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的 。 二、实验设计 关于土壤中某细菌的分离与计数实验操作步骤如下： ．取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。 2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基 3．微生物的与观察 4．细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 的方法。 2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 将尿素分解成了 。氨会使培养基的碱性 ，PH 。因此，我们可以通过检测培养基 变化来判断该化学反应是否发生。 3、在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 ，说明该细菌能够 。 巩固练习 1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找………………………………………( ) A．土壤中 B．海水中C．热泉中 D．冷库中 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是………………………………………( ) A．KH2PO、Na2HP0、MgS04·7H2、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B．KH2PO、Na2HP0、MgS04·7H2、葡萄琼脂、水 C．KH2PO、Na2HP0、MgS04·7H2、尿素、琼脂、水 D．KH2PO、Na2HP0、MgS04·7H2、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为01mL)…………………………( ) A．234×108 B．234×109 C．234 D．234 4．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有…………………( ) ①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误④没有设置对照 A．①②③ B．②③④C．①③④ D．①②④ 关于土壤取样的叙述错误的是………( ) A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3cm左右，再取样 C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤 下列操作步骤正确的…………( ) ①土壤取样 ②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中 ③吸取01mL进行平板101、102、103、104、105、106、107稀释度 A．①→②→③→④ B．①→③→②→④C．①→②→④→③