壳聚糖对茚三酮-氨基己酸体系的荧光增强作用.docVIP

壳聚糖对茚三酮-氨基己酸体系的荧光增强作用 学生：冯小芳 指导教师：李省云 太原师范学院化学系 094班 摘 要 本文用荧光光度法研究了壳聚糖对茚三酮-氨基己酸体系的荧光增强作用，探究了最佳的增强条件。茚三酮与氨基己酸在一定条件下生成有弱荧光的产物，加入壳聚糖后，此体系的荧光强度明显增大。由实验得知，在pH=4.00的三酸缓冲介质中，加热温度为96℃，加热反应时间为80min时，此增强作用最大。 关键词 壳聚糖 茚三酮 氨基己酸 荧光增强作用 引言 壳聚糖[Chitosan，简称CTS，β(1,4)-2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖][1],白色或灰白色半透明的片状或粉末状固体，无味，无臭，无毒性，具有生物降解性，同时具有多种生物活性,不溶于水，溶于酸，可水解，可烷基化，属于聚合物，相对分子质量较大，一般用粘度高低的数值来表示。壳聚糖具有良好的化学物理特性和广泛的用途[2-3],其应用于分析化学方面已有报道[4-6]。壳聚糖可制成吸附膜用于微量铜的富集[7],亦可通过化学反应合成一种新的络合剂用于铁的双波长分光光度法测定。 茚三酮与氨基酸的反应生成蓝紫色产物ruhemann,s purple（RP）[8]，该产物有荧光，据此可以进行氨基酸的测定[9]。但是，由于RP荧光的很弱，应用时具有一定的局限性，目前已有用金属离子和稀土离子络合提高RP的荧光强度的报道[10-12]，但荧光强度仍较小。 在一定条件下，壳聚糖与茚三酮相互作用产生较强荧光[13-14]，因此，本文研究了壳聚糖对茚三酮-氨基己酸体系的荧光增强作用，同时还探讨了此增强作用的最佳条件。实验表明，在合适的温度、酸度和反应时间下，壳聚糖确实对RP的荧光有较大的增强作用，这不仅对氨基己酸的测定有一定的实际意义，而且也丰富了壳聚糖在分析化学中的应用范围[15]。 2 实验部分 2.1 主要仪器和试剂 仪器 WGY-10型荧光分光光度计（天津市港东科技发展有限公司）;HH-6电热恒温水浴锅（北京科伟永鑫实验仪器设备厂）；211型酸度计(意大利Hanna)；JB-1A型搅拌器; 92M-202A-DR电子天平（普利赛斯国际贸易上海有限公司）；移液管；吸量管；比色管；容量瓶。 试剂 壳聚糖（生产单位和级别？）；茚三酮（天津市光复精细化工研究所,分析纯）；氨基己酸（国药集团化学试剂有限公司,生化试剂）；硼酸（朝阳化工厂生产，优级纯）；磷酸（天津市天力化学试剂有限公司,分析纯）；冰乙酸（天津市富宇精细化工有限公司,分析纯）；氢氧化钠(天津市化学试剂一厂, 分析纯)；HCl(1:1)；高纯水。 2.2 溶液的配制方法 壳聚糖溶液的配制：准确称取0.10221g壳聚糖，先加适量高纯水，再缓慢滴加1:1的HCl溶液，直至溶解，转移到100mL的容量瓶中，并洗涤烧杯3次，洗涤液倒入容量瓶中，再用水稀释至刻度，摇匀，配成1g/L的溶液。 茚三酮溶液的配制：准确称取0.89308g 茚三酮，用高纯水溶解，并转移到100mL的容量瓶中，用高纯水稀释至刻度，摇匀，配成8.9g/L的溶液。 氨基己酸溶液的配制：准确称取0.10479g氨基己酸，用水溶解，转移到100mL的容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，配成1g/L的溶液。 三酸溶液的配制：准确称取2.47g硼酸于一干净烧杯中，用高纯水溶解，转移到1000 mL的容量瓶中，再分别移取2.29mL冰乙酸和2.70mL的磷酸，用水稀释至刻度，摇匀，配成0.04mol/L的溶液。 不同pH值的三酸缓冲溶液：0.05mol/L的三酸溶液，在酸度计和磁力搅拌器下，用0.2mol/L的氢氧化钠溶液调节。 pH=4.00的三酸缓冲溶液的配制：取上述配好的三酸溶液，置于酸度计下并在搅拌条件下，用0.2mol/L的氢氧化钠溶液逐渐调节至pH=4.00。 2.3 试验方法 于10mL比色管中，准确移入0.4mL8.9g/L的茚三酮溶液、3.0mL1g/L的氨基己酸溶液以及2.0mL1g/L的壳聚糖溶液，再用pH=4.00的三酸缓冲溶液稀释至刻度，置于沸水（96℃）浴中，加热反应80min后，冷却至室温。以370nm为激发波长，在400-550nm之间测定荧光光谱及荧光强度。（有的条件实验用量与此不同，但比例相同） 3 结果与讨论 3.1 茚三酮-氨基己酸体系的荧光形成条件 3.1.1 波长的选择 在pH=4.55的三酸缓冲溶液条件下，依次测定了反应过程中所需各体系：茚三酮、茚三酮+氨基己酸、茚三酮+壳聚糖、茚三酮+氨基己酸+壳聚糖的激发和发射光谱（见下图），同时各体系的激发和发射波长数据也见表1。 表1 波长的变化 体系 茚三酮 茚三酮+氨基己酸 茚三酮+壳聚糖 茚三酮+氨基己酸+壳聚糖