高效液相色谱法标准操作程序.docVIP

高效液相色谱法标准操作程序 1．目的： 2．范围：适用于高效液相色谱法的检查或含量测定。 3．职责：QC负责本规程的实施；R= W1+W2 式中 tR2中为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为相邻两峰的峰宽。 除另有规定外，分离度应大于1.5。 4．3．3 重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应大于2.0%。也可按品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应不大于2.0%。 4．3．4拖尾因子：为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为： T=W0.05h/2d1 式中 W0.05h为峰高处的峰宽； d1为峰极大至峰前沿之间的距离。 除另有规定外，T应在0.95-1.05之间。 4．4测定法：定量测定时，可根据供试品的具体情况采用峰面积或峰高法。测定杂质总量时，须采用峰面积法。 4．4．1内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： 校正因子（f）=(AS/CS)/(AR/CR) 式中 AS为内标物质的峰面积或峰高； AR为对照品的峰面积或峰高； CS为内标物质的浓度； CR为对照品的浓度； 再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或其杂质）和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： 含量（CX）= f·（AX/ AS/CS） 式中 AX 为供试品（或其杂质）峰面积或峰高； CX为供试品（或其杂质）的浓度； AS、CS 、f的意义同上。 当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。 4．4．2外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量：按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量： 含量（CX）= CR·（AX/ AR） 式中符号的意义同上。 4．4．3加校正因子的主成分自身对照法：测定杂质含量时，可采用加校因子的主成分自身对照法。在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按上述（4．4．1）法计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文中，用于校正杂质的实测峰面积。 测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品溶液稀释成与杂质限度相当溶液作为对照溶液，进样，调节仪器灵敏度（噪音水平可接受为限）或进样量（以柱子不过载为限），使对照溶液的主成分色谱峰高约达满量程的10%~25%或其峰面积能准确积分（面积约为通常条件下满量程峰积分值的10%）。然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品溶液记录时间除另有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算杂质含量。 4．4．4不加校正因子的主成分自身对照法 当没有杂质对照品时，可采用不加校正因子的主成分自身对照法。同上述（4．4．3）法配制对照溶液并调节仪器灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，前者的记录时间除另有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。 若供试品所含的部分杂质未与溶剂峰完全分离，则安规定先记录供试品溶液的色谱图I，再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。色谱图I上杂质峰的总面积（包括溶剂峰），减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积，即为总杂质峰的校正面积。然后依法计算。 4．4．5 面积归一化法 由于峰面积归一化法测定误差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。方法是测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率，即得。 由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试口若悬河某杂质或主成分含量时，以定量环进样为好。 5．标准依据：2000年版。