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绪 论 一、实验目的 组织学与胚胎学教学和其他医学课程一样，包括理论教学和实验教学两部分。实验目的不仅在于验证理论，加深对理论内容的理解；而且使同学能熟练掌握光学显微镜的使用方法，进行基本技能训练；同时培养同学们实事求是的科学态度，以及独立思考、分析问题和解决问题的能力，进而达到提高实验教学质量之目的。 二、实验室规则 为提高医学生动手能力，掌握基本的操作技术和方法，培养学生科学的思路、严谨的工作作风和实事求是的工作态度，提高实验教学质量，请同学遵守以下规则： （一）严格遵守作息时间，不无故缺席。 （二）学生进实验室，应统一穿白大衣，保持衣冠整洁。 （三）学生上实验课时，应准备好铅笔、红、蓝笔、实验指导、实验报告及教科书等学习用品。 （四）凭有关证件,领用显微镜，不得自行拆、修，以免造成仪器损坏。要爱护公物，学生不得擅自操作多媒体教学仪器，无故损坏教学仪器等，应按价赔偿，并予以批评教育。 （五）实验课时，每人发放一盒教学切片，学生应爱护切片，保持完好性，若有损坏按价赔偿。 （六）保持实验室安静，课堂中不得大声喧哗，随便走动，有问题可举手提问，在老师指导下认真完成实验。 (七)保持实验室清洁，不得在实验室乱扔垃圾纸屑，不随地吐痰；每次实验结束，由班长指定专人打扫室内卫生，关好水、电、窗、门，方可离开。 三、光学显微镜的构造使用方法 (一) 光学显微镜的构造：显微镜主要由机械部分和光学部分组成。 1、机械部分：包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、滤片槽、载物台、玻片夹持器手轮、粗调焦手轮和细调焦手轮等。 2、光学部分：主要包括 （1）照明器：是显微镜的灯光照明系统。 （2）集光器：是一个装在载物台下可以沿着光轴方向垂直移动的透镜系统，它的主要作用是把照明光线聚集在被观察的物体上。 （3）光阑：在集光器上装有孔径光阑，它对于物像的质量和分辨力的大小有着重要的作用。 （4）物镜：分低倍、高倍和油镜三种。低倍镜放大倍数是4×和10×，高倍镜是40×，油镜是100×。 （5）目镜：常用放大倍数为10×的目镜，物像的放大倍数＝目镜倍数×物镜倍数。目镜内有一黑色指针，可作指示镜下结构。 （二）光学显微镜的使用方法 (1)取镜：拿光学显微镜时必须左手平托镜座，右手紧握镜臂，切忌单手提取导致零部件脱落。 (2)接通电源：先插上电源插座，再打开电源开关。 (3)放置切片：将组织切片盖玻片的方向朝上，放置在载物台上，用标本夹固定好。旋转载物台上玻片夹持器的手轮，调节载玻片上有组织的部分对准光源的正当中。 (4)调节焦距：从侧面观察低倍镜头，旋转粗调焦手轮使镜头接近载玻片固定为止，再一边从目镜观察，一边旋转细调焦手轮，直到视野中的物像清晰为止。 (5)观察姿势：用显微镜观察组织切片时的正确姿势是正坐，左手旋转玻片夹持器的手轮观察玻片中上下左右的视野，右手轻轻转动细调焦手轮调节焦距使镜下物像清晰。 (6)高倍镜观察：需转换高倍镜头时，必须先在低倍镜下将要观察的部分移到视野正中，物像清晰后直接转换高倍镜，此时镜下隐隐约约可见物像，再稍微转动细调焦手轮即可看清楚物像。 (7)油镜观察：使用油镜时，也需经过肉眼、低倍镜和高倍镜的初步观察，选好要观察的部位，将其移至视野中央。转开物镜头，在切片上滴一滴香柏油，转换油镜头(100×)，同时肉眼看着将镜头浸入油内。然后一方面用目镜观察，另一方面慢慢转动细调焦手轮，直到看清物像后，再用细调焦手轮继续调节进行观察。油镜用完后，用擦镜纸沾少许二甲苯擦去油镜头上的油渍，再用干净擦镜纸拭抹镜头。 (8)收镜：观察完毕，取下载玻片，按编号放回切片盒内。物镜转成“八”字形，下降镜头使之轻触载物台，先关电源开关，再拔下电源插座，最后将显微镜放入镜柜。 四、切片标本的一般制作方法 通常在显微镜下观察的组织或胚胎切片，是从人体和动物体取下的小块组织，经过固定、脱水、包埋、切片和染色等步骤制作而成。通过上述步操，使各种不同的组织或细胞微细结构，尽可能保持在生活时的状况。制作光学显微镜切片标本的方法很多，最常用的是石蜡切片法，现简介如下： (一)取材：取正常新鲜材料 （要求死后不超过6 h，否则组织自溶），切成3×5×2毫米左右的小块。 (二)固定：将取得的组织块放入固定剂中，使组织中蛋白质迅速凝固，并尽可能保存其他成分，以保持其生活时的形态。常用固定剂如10%中性甲醛、4%多聚甲醛等。 (三)冲洗：将多余的固定剂以流水冲洗除去。 (四)脱水：最常用的脱水剂为酒精，用各级酒精逐步将组织内的水取代，以利于透明、浸蜡。注意:脱水的具体时间视组织块大小而定。