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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 重组载体pRevTRE/HSVtk构建流程 * MCF-7细胞转染实验程序示意图 * MCF/TRE/tk/Tet-On细胞株的建立 * 在Dox浓度为1μg/ml时，MTT检测不同浓度GCV对MCF/TRE/tk/Tet-On 细胞存活率的变化 * 当GCV浓度为1μg/ml时，不同Dox浓度对MCF/TRE/tk/Tet-On细胞存活数的影响 * ? MCF/TRE/tk/Tet-On细胞的旁观者效应 ? 1组(n=4) 2组(n=4) 3组(n=4) 4组(n=4) 5组(n=4) 6组(n=4) MCF-7 100% 95% 90% 75% 50% 0% MCF/TRE/tk/Tet-On 0% 5% 10% 25% 50% 100% 克隆计数（均值±SE） 36.0±0.81 34.0±0.81 4.5±0.65 5.0±0.71 5.0±0.58 3.5±0.50 * 可调控性重组逆转录病毒在乳腺癌基因治疗中的实验研究 * MCF-7皮下接种BALB/c 裸鼠成瘤 待肿瘤长至 80 mm3后瘤体内注射重组逆转录病毒 Doxycycline诱导7天 成瘤裸鼠分成 DMEM、Virus+GCV、 GCV+Dox 及 Virus+Dox+GCV治疗15～35天 观察抑瘤效应及相关基因的表达 基因治疗体内实验技术路线 制备重组逆转录病毒 * 逆病毒转染的 PA317 阳性细胞克隆筛选 上图分别为转染 pRevTRE/ HSVtk、 pRevTet-On 、pRevTRE 载体的 PA317 细胞经潮霉素B、G418 筛选2周后形成的抗性克隆 (×100) * BALB/c裸鼠乳腺癌移植瘤动物模型的建立 * BALB/c裸鼠移植瘤的抑瘤实验 A：DMEM 组； B：GCV+Dox 组； C：GCV+病毒组； D：Dox+GCV+病毒组 * BALB/c裸鼠移植瘤治疗结束后的肿瘤体积 * Groups nude mice x±SD (gram) DMEM group 6 2.70±1.17 GCV+Dox group 6 1.84±0.34 GCV+virus group 6 1.32±0.39 Dox+GCV+virus group 6 0.30±0.20 * Tumor weight of Dox+GCV+virus group compared with other groups，*P0.05. Table Tumor weight of groups after GCV treatment * BALB/c裸鼠移植瘤的抑瘤实验 * M: 100 bp Marker； 1： DMEM 组荷瘤裸鼠肿瘤；2： GCV+Dox 组荷瘤裸鼠肿瘤； 3： GCV+病毒组荷瘤裸鼠肿瘤；4： Dox+GCV+病毒组荷瘤裸鼠肿瘤 RT-PCR 检测肿瘤组织 HSVtk 的表达水平 * BALB/c裸鼠移植瘤的病理形态学检测 A：DMEM 组； B：GCV+Dox 组； C：GCV+病毒组； D：Dox+GCV+病毒组 Tumor sections stained by HE (X400) * * 1. From Stieger K et al: “In vivo gene regulation using tetracycline-regulatable systems”. ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, 2009,61(7-8):527-541. As it has been me
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