菌种保藏与使用技术课件.pptVIP

* 菌种鉴定 简单的讲可以采用目前比较成熟的商品化鉴定技术，如API鉴定条 基本程序为： 对疑似菌种进行纯培养 进行染色镜检 根据染色情况，并结合显色培养基等鉴定的初步信息，选择合适的鉴定条 根据操作说明书，得到各生化反应的鉴定结果，通过查阅检索表，得到菌种鉴定的初步结果 也可以采用半自动或全自动的微生物鉴定系统 * 请教黑曲霉及白色念珠菌具体传代及培养技术，操作中有何注意点？ 采用的培养基应为改良马丁琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基 传代操作建议在生物安全柜内进行 白色念珠菌 斜面培养基的传代：取斜面培养的菌种管，用接种环取1白金耳，在待接种的培养基斜面上划线接种，培养即可 液体培养基的传代：取液体培养的菌种管，用毛细吸管取适量，在待接种的培养基斜面上涂布接种，培养即可 培养条件：20～25℃，24小时 * 黑曲霉 斜面培养基的传代：取斜面培养的菌种管，用灭菌水或灭菌生理盐水（也可以按照2010年版药典公示稿的方法）3～5ml洗脱孢子，吸取孢子悬液，在待接种的培养基斜面上涂布接种，培养即可 孢子悬液的传代：取孢子悬液，用毛细吸管取适量，在待接种的培养基斜面上涂布接种，培养即可 培养条件：20～25℃，4～5天 注意点 减少形成气溶胶的操作 佩戴手套和口罩进行操作 * 生孢梭菌计数：用营养琼脂培养基倒皿，厌氧罐培养长不出来，经确认菌是有活性的，厌氧指示颜色正确，-5，-6，-7均无菌落生长 对于生孢梭菌的计数，建议将所有稀释级均注皿培养 培养中的厌氧环境对生长与否是决定性的 有条件的实验室建议采用厌氧培养工作站 小型的厌氧培养可采用厌氧培养罐，但应严格按照使用说明操作，注意厌氧试剂、厌氧指示剂、催化剂的有效性 * 如何对菌种进行复壮，传代之前是否一定要做微生物学鉴定，确认是否有变异。 复壮的方法应根据待复壮的菌种的保藏形式来确定。对冻干菌种，复壮操作较为繁琐 微生物传代中的菌种确认是必须的 * 阳性对照是否必须购买菌种？菌种应该怎样保存？有效期一般为多长时间？ 对照用菌种应采用标准菌种，一般应外购 保存方法如前述 有效期根据不同菌种，不同的保藏方法而异，如采用斜面移植保藏法，不能形成芽孢的细菌有效期一般为1个月，能形成芽孢的细菌有效期一般为3个月，真菌的有效期为3个月。 * 铜绿假单胞菌在半固体培养基中生长不是很好，应如何保藏较好？ 菌种铜绿假单胞菌保存时放冰箱好还是室温好，贮存过程中菌种变色是否不能使用？ 因铜绿假单胞菌有运动性，因此在半固体培养基中穿刺培养后无法形成穿刺线。接种时，将半固体取出直接在培养基上涂布即可。 也可以采用超低温冷冻的方式保藏，效果好 斜面保藏的菌种在冰箱中放置应注意控制温度，一般不宜低于4℃，也可以放置在室温中，但应控制温度不超过25 ℃。菌种保存过程中，的确会存在色素退化 的情况，此时对菌种进行传代培养，即可重新表现出色素，仍可使用。 * 今年购买的菌液接种后，生长出来较稀薄，是否因为混匀的关系，但放置菌液的瓶子混匀感觉也不是安全，请问是否有更好的方法，或者是否能仍提供固体培养基的菌种 建议采用琼脂斜面培养基复壮上述超低温冷冻标准储备菌株。从这些斜面培养基上取培养物接种，制备工作用浓菌液，其浓度可以得到保证 * 短小芽孢杆菌如何鉴定 通过显微鉴别，为不呈链状排列的杆菌，革兰氏染色为阳性。 营养琼脂斜面上菌苔光滑，薄，闪光，蔓延，不粘着，常常是浅黄色。 生化试验可选做明胶穿刺、淀粉水解和硝酸盐还原 ，结果为明胶缓慢液化，淀粉水解阴性，硝酸盐还原阴性。 采用API鉴定条，结合染色镜检和接触酶实验等结果 * 菌种传代至第5代时，还能不能用该斜面菌种接种制备工作用菌液 严格讲，这种操作是不符合药典规定的。药典所指的传代次数不超过5代，应该是指用于实验的工作用菌液。因此，从保藏的角度看，制备成的斜面保藏菌种只能到第4代。 * 菌种的常识，如菌种的保存、适宜的生长环境及存活时间、常见菌种的形态 细菌： 斜面保藏法：一般使用营养琼脂培养基，生孢梭菌使用液体硫乙醇酸盐培养基，在30～35℃培养18～24小时。存活时间1～3个月。 低温冷冻保藏法：一般使用营养肉汤培养基，生孢梭菌使用液体硫乙醇酸盐培养基，在30～35℃培养18～24小时。存活时间至少半年。 真菌： 斜面保藏法：使用改良马丁琼脂培养基，也可使用沙氏葡萄糖琼脂培养基，在20～25 ℃培养24小时至5天 低温冷冻保藏法：使用改良马丁培养基或沙氏葡萄糖培养基，在20～25 ℃培养24小时。黑曲霉不适用液体培养基培养。 * 谢 谢 菌种保藏和使用技术 浙江省食品药品检验所 王知坚 * 菌种保藏和使用的有关概念 菌种保藏和使用的有关法规 我所现有菌种保藏管理规程 基层单位可以使用的菌种保藏使用技术 有关菌种问题的答复 * 概念 标准菌株：由国内