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3′―大豆苷元磺酸钠对四氯化碳所致小鼠肝损伤和肝药酶的影响 　　[摘要] 目的 研究3′-大豆苷元磺酸钠（3′-DSS）对四氯化碳（CCl4）所致小鼠肝损伤的影响。 方法 取雄性昆明种小鼠60只，每组12只，随机分为对照组、模型组、联苯双酯阳性对照组、0.1 mg/kg 3′-DSS组和0.3 mg/kg 3′-DSS组。每星期进行2次腹腔注射10%CCl4植物油溶液0.1 ml/10 g，造成慢性肝损伤模型，期间给予灌服2.5 mg/kg联苯双酯、0.1 mg/kg 3′-DSS、0.3 mg/kg 3′-DSS，持续6周，给药结束后，分别取血和肝脏，分离血清，制备肝均浆，检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性和肝药酶含量。 结果 与对照组比较，模型组小鼠肝功能明显下降，ALT、AST水平明显升高，肝药酶含量明显下降；与模型组比较，0.1、0.3 mg/kg 3′-DSS治疗组ALT、AST水平均有明显下降；肝药酶含量也明显增加。 结论 3′-DSS对CCl4所致小鼠肝损伤具有明显的保护作用。 　　[关键词] 3′-大豆苷元磺酸钠；肝损伤；四氯化碳；丙氨酸氨基转移酶；天冬氨酸氨基转移酶；肝药酶 　　[中图分类号] R-05 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）07（c）-0018-03 　　肝脏是人体最大的实质性器官，担负着消化、解毒、分泌和生物合成功能，其功能障碍直接影响人体健康，甚至危及生命。肝病的发病机制较为复杂，涉及炎症反应、免疫功能紊乱、代谢障碍、自由基损害及质膜损伤等多个生理病理过程。对肝损伤的防治目前仍是全球医疗范围内极其重要的一个课题。因此，本研究通过建立实验性肝损伤动物模型、研究肝病的发病机制，筛选保肝药物，探索其作用机制，对于揭示肝损伤的生理病理变化和提高临床治疗水平具有十分重要的意义。 　　3′-大豆苷元磺酸钠（3′-daidzein sulfonate sodium，3′-DSS）是中药葛根的主要有效成分大豆苷元结构修饰和改性的新合成的水溶性物质，其化学结构式见图1。目前，国内外对3′-DSS对肝损伤的保护作用研究尚未见报道。有研究结果显示，3′-DSS具有耐缺氧、抗氧化、抗心律失常及心肌缺血再灌注损伤再灌注损伤有保护等作用[1-7]。本研究拟通过检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性和肝药酶含量，观察3′-DSS处理后对四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝损伤的保护效应。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　健康雄性昆明（Kunming）小鼠，体重（21±3） g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物许可证号SCXK（湘）2011-003，合格证号：NO.4304701590。 　　1.2 实验药品 　　CCl4（分析纯，江西洪都试剂化工厂生产），临用前与精制植物油混合配成10%（W/W）CCl4植物油溶液；3′-大豆苷元由沈阳药科大学植化教研室提供，用生理盐水配成所需浓度；联苯双酯滴丸购自北京协和药厂，配成混悬液。 　　1.3 仪器 　　BS224S电子天平（德国赛多利斯集团）；MIKRO22R低速冷冻离心机（杭州普瑞特仪器有限公司）；HS-B6恒温水浴箱（湖北省黄石市医疗器械厂）；微量加样器（GILSON公司、Dragon Lab、Eppendorf公司）；全自动生化分析仪检测（德国拜耳1605型），722N可见光分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。 　　1.4 实验方法 　　按体重将小鼠随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、模型组、阳性药物对照组（2.5 mg/kg联苯双酯）以及0.1、0.3 mg/kg 3′-DSS组，正常组和模型组给予生理盐水（0.1 ml/10 g），每天按体重灌胃给药，给药剂量为0.1 ml/10 g，此外每周二、六除对照组外均进行腹腔注射10%CCl4植物油溶液0.1 ml/10 g，并记录小鼠体重以及活动情况，持续6周。另一组分组与给药同上，连续给药10 d。末次给药后禁食过夜，24 h后断头处死，放尽血液并迅速剖开腹腔，用冷冻生理盐水冷却冲洗肝脏并取出，称取一定量的肝组织，剪碎，加4倍量冰冷的15%甘油-20 mmoL磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4），用玻璃匀浆器匀浆，4℃下用高速冷冻离心机以9000×g离心15 min，得上清液。采用双缩脲法测定上清液蛋白质含量[8]。在比色杯中加入15%甘油-20 mmoL PBS 2 ml和上清液部分0.1 ml，混匀后加入数毫克保险粉并扫描400～500 nm的基线（调零）。然后在比色杯中通入一氧化碳约1 min，静置3 min，再于400～500 nm处扫描样品得到肝药酶的