脂肪干细胞的体外培养.ppt

脂肪干细胞基础与临床 干细胞（Stem cell，SC）： 干细胞（Stem cell，SC）是有自我复制、高度增殖和多向化潜能的细胞群体，这些细胞以通过细胞分裂维持自身细胞的大小，同时又可以进一步分成为各种不同的组织细胞，从构成机体各种复杂的组织器官。 干细胞技术: 又称为再生医疗技术，是指通过对干细胞进行分离、体外培养、定向诱导、甚至基因修饰等过程，在体外繁育出全新的、正常的甚至更年轻的细胞、组织或器官，并最终通过细胞、组织或器官的移植实现对临床疾病的治疗。 干细胞是整个人体生长发育的基础“材料”。 干细胞生物学特性 脂肪干细胞生物学特性 2001年，Zuk等首次从人抽脂术抽取的脂肪组织中分离出一种多向分化干细胞，因其与骨髓间充质干细胞(BMSC)形态相似而称为脂肪间充质干细胞（ASC）。 脂肪干细胞具有向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、造血、肝、胰岛和神经等多种细胞方向分化的多分化潜能,是一种理想的种子细胞。因脂肪干细胞具有分化为脂肪的潜能，且其具有易获得性、可迅速扩增、不易衰老等特点，目前脂肪干细胞已成为脂肪组织工程中种子细胞的研究热点。 Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以及来自间叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细胞在ASC中的含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步确认和识别真正的ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。  脂肪来源干细胞 脂肪来源干细胞 脂肪来源干细胞的命名 脂肪来源干细胞 (Adipose Derived Stem Cell, ADSC) 脂肪来源间充质干细胞 (Adipose Derived Msenchymal Stem Cell, AD-MSC(ASC)) 脂肪来源血管基质成分 (Stromal Vascular Fraction,SVF) 富含大量的CD34+细胞,从脂肪组织直接获得 富含一定量的CD34+细胞,SVF培养P0-P2 不富含CD34+细胞,SVF培养P2之后 脂肪干细胞的鉴定 在缺少分化刺激因子的条件下，ASC表面标志蛋白有HLA-ABC、CD9、CD10、CD13、CD29、CD34、CD44、CD49、CD54、CD55、CD59、CD105、CD146、CD166； 经过14d的诱导培养后, ASC虽然发生了形态变化，表现出成脂细胞、成软骨细胞、成骨细胞等分化的特征，但表面蛋白的表达却大致与未分化前一致，这些表面蛋白与BMSC的表面蛋白很相似。 ASC和BMSC均表达CD13、CD29、CD44、CD105，均不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR。虽然从分子标识上看ASC和BMSC具有相同的表面粘附分子和受体分子，但两者仍有区别。ASC表达CD49d，而不表达CD106，BMSC则相反，造成这种区别的机制可能与细胞所处的微环境及具体功能有关。 间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。???  脂肪干细胞的表面标记 a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(Eselectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin、Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。 不同的试验结果结果有不同，但这种差异可能是在细胞分离、培养、纯正化方法不同，以及免疫组化技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞是相似的。 脂肪干细胞的体外培养 脂肪干细胞在脂肪组织中含量