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应用病毒治疗结直肠癌的研究进度 　　结直肠癌(colorectal carcinoma，CRC)是世界第三大常见的恶性肿瘤，发病率呈持续上升趋势。在中国，结直肠癌5年生存率仅32%，排位死因顺位已上升到第5位。尽管结直肠癌的诊治水平不断提高，但由于其早期症状隐匿，仍有20%患者确诊时即为转移性结直肠癌，且即使进行根治手术仍有50%～60%因微小转移灶而发生转移。化疗对于局部淋巴结转移者疗效有限，而在伴有远处转移者中疗效尚不肯定。远处转移、对化疗耐药、反复复发使结直肠癌患者的预后欠佳。为了提高结直肠癌的疗效及预后，人们不断深入研究结直肠癌发生及发展机制的研究，已取得不少成果。随着基因工程的发展和分子生物学的应用，利用病毒治疗肿瘤在近20年得到迅速发展，被基因改造的病毒许多已行体内外抗肿瘤疗效评估。 　　1 基于病毒治疗肿瘤的发展史 　　利用病毒治疗癌症已有100多年历史。然而其用来治疗肿瘤最初是源于偶然事件，肿瘤患者患有感染性疾病时，肿瘤出现短暂的临床缓解。1904年有报道，1例白血病患者在一次流感病毒感染后病情意外好转。100多年来，病毒一直被作为实验研究对象行抗肿瘤治疗，但人们对该领域的兴趣一直波动不定。直到1991年Martuza等报道，转基因单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)在恶性胶质瘤治疗中有一定疗效，才使基于病毒的抗肿瘤疗法日益受人关注。2005年中国国家食品药品监督管理局首次批准重组人5型腺病毒(安柯瑞)注射液用于临床治疗。至今，全世界已有200多项病毒抗肿瘤治疗的研究专利，且许多已完成临床Ⅰ/Ⅱ期试验。 　　2 溶瘤病毒直接破坏肿瘤细胞溶 　　瘤病毒(oncolytic virus，OV)治疗结直肠癌是基于病毒选择性地在肿瘤细胞内大量复制最终破坏肿瘤细胞，释放子代，感染周边肿瘤细胞，在瘤体内广泛播散，而对正常组织细胞无杀伤作用。肿瘤细胞裂解后，肿瘤释放原始抗原和热休克蛋白，导致强烈的机体抗肿瘤免疫效应。另外，有些溶瘤病毒还能产生凋亡蛋白，有些可通过表达病毒蛋白或非特异性炎症反应来增强抗肿瘤免疫。NV1020是减毒的单纯疱疹病毒，删除了UL/L交界的15 kb区域和胸苷激酶基因及其启动子UL24，另外还插入了外源性TK 基因，该基因受ICP4 启动子的控制。NV1020Ⅰ/Ⅱ期临床试验以转移性结直肠癌患者为研究对象，Ⅰ期13例患者通过肝动脉注射NV1020，患者出现短暂的发热而无其他不适，认为NV1020 是安全的。Ⅱ期入组多线治疗后病情仍进展的患者22例，注射NV1020后，50%患者病情稳定，继续化疗后整体肿瘤控制率为68%(其中PR 1例，SD 14例)，中位生存期平均延长6.4个月。因此NV1020在结直肠癌肝转移患者中具有良好疗效且不良反应小，另外，其可能通过特殊的、系统的溶瘤免疫应答逆转肿瘤的化疗耐药性，增加放疗敏感性。目前，一项NV1020联合细胞毒药物或靶向药物杀伤肿瘤细胞的大型随机Ⅱ/Ⅲ期临床试验正在开展。 　　胃肠癌腹膜转移是其常见转移形式，约超过一半患者术后复发病例为腹膜转移，患者预后不理想。Eveno等采用改造的溶瘤痘苗病毒GLV-1h153表达人钠碘转运体基因(hNIS)行体外实验，该病毒能感染复制并溶解人结直肠腺癌细胞。在小鼠结直肠癌腹膜转移模型上腹腔注射GLV-1h153后，肿瘤显著减小。另外，GLV-1h153 感染的组织还可经131ISPECT扫描和荧光光学成像显示。因此，GLV-1h153不仅可用于治疗，还可用于腹膜转移病灶的诊断和评估。 　　对于溶瘤病毒，缺点是大部分需要瘤内局部注射，但并非所有的溶瘤病毒均如此，这种区别的原因尚不清楚。Adair等选取结直肠癌肝转移患者为试验对象，在转移病灶切除前先行呼肠孤病毒静脉注射1个周期。虽然患者在治疗前体内已有抗病毒抗体，但是血细胞中仍能检测出具有细胞毒性的呼肠孤病毒，而血浆中却未检测出，这提示细胞转运可保护病毒免受抗体破坏，使其进入肿瘤组织，发挥抗肿瘤效应。在转移病灶手术标本中，病毒蛋白在瘤细胞内表达而在正常肝组织中未表达。提示呼肠孤病毒可能被免疫细胞携带至肿瘤组织并只在瘤细胞内复制。另外，细胞载体也可保护病毒免遭体内抗体的中和，这种载体也较便捷：Mader等用自体脂肪间充质干细胞作为麻疹病毒的载体，已被美国食品药品监督管理局批准用于卵巢癌的临床研究。 　　3 基于病毒载体的基因治疗 　　溶瘤病毒具有无限复制性和靶向性，可作为基因载体，携带外源性抗癌基因，使其在发挥溶瘤功能的同时，还可大量表达抗肿瘤基因，产生双重抗癌效应。目前，越来越多携带治疗基因的溶瘤病毒被用于抗癌研究，并取得了可喜成果[19]。3.1 癌基因和抑癌基因治疗结直肠癌的发生是多基因致病的过程，通过