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基因治疗用于人类疾病的现状 [摘要] 基因治疗的策略包括基因替代、基因修正、基因增强、基因抑制和基因失活。基因转移的方法有物理、化学和生物3大类。其中生物转移在人类细胞中应用最为广泛。生物法主要是指病毒介导的基因转移,是通过病毒为载体，将外源基因通过重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞。研究最为系统深入的、应用最多、最成功的是逆转录病毒，用于人体细胞实验的逆转录病毒以慢病毒为佳。 基因治疗（gene therapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病而实施的相应策略。目前国际上对人类基因治疗还处于探索阶段，虽然不可避免的会产生伦理方面的争议，但其独特的优点和美好的前景已经展示在世人的面前，现就人类基因治疗的现状及伦理争议作一综述。 1基因治疗的发展及现状 早在20世纪60年代初就有人提出了基因治疗的设想,70年代早期有科学家开始尝试将遗传物质导入人体细胞中以治疗疾病,但试验以失败而告终。20世纪80年代初,Anderson首先阐述了基因治疗的理念[1]。1980年美国的Cline教授第1次进行了人类真正意义的基因治疗。他向美国国立卫生研究院（NIH）提出人类基因治疗草案，可惜未获批准。但他还是铤而走险，在以色列对1例β-地中海贫血的患者进行了基因治疗，但由于事先未征得批准,结果是以其自身在临床研究领域销声匿迹而告终[2]。20世纪80年代以后,从小鼠到灵长类等一系列转基因动物试验获得了空前的成功,人类基因治疗的话题再次被提出，而有关人类基因治疗的原则因此得以在美国及欧洲及时制定或修订。基因治疗之父An－derson就一直从事人类基因转移和治疗的研究,他们慎重地进行疾病的选择，对将目的基因转移到靶细胞的载体也重新进行了设计、改进和评价，取得了令人瞩目的成绩[3]。1989年Rosenberg正式动手临床操作,采用免疫-基因治疗,给第1批晚期黑色素瘤患者输注NeoR/TIL，患者治疗后肿瘤均不同程度缩小,其中1例存活2年以上,1例存活近1年。提示人体基因治疗，至少是在短期，对患者不仅无明显副作用和损害且有明显获益。这是世界上首次获得批准的临床基因标记性试验，虽然不能说是严格意义上的临床基因治疗,但其成功的意义重大。不仅使人类基因治疗的科学性和可行性得以逐步阐明,而且使社会大众逐渐理解和了解了这一划时代的新技术，人体基因治疗的时机因而趋于成熟[4]。1992年起美国国立卫生研究院批准了一系列人肿瘤-免疫基因治疗试用方案，见表1。1991年我国首例基因治疗B型血友病也获得成功。B型血友病是一种因缺乏凝血因子IX而导致的遗传性出血性疾病。复旦大学的医学科技工作者将携带有IX因子的逆转录病毒载体转染B型血友病患者的成纤维细胞,再将转染后的患者成纤维细胞悬液注射到患者皮下。结果患者血浆中IX抗原和IX因子活性升高了1～2倍且持续2年以上，患者全身出血症状有所好转,每年所需IX因子替代治疗次数逐渐减少。此后跟踪4～7年未发现与基因治疗相关的毒副作用。这是迄今为止世界上唯一进行基因治疗的血友病病例，此项研究成果已获国家发明二等奖[5]。 2基因治疗的方法及应用 目前基因治疗的主要方法有2种:一是直接疗法：纠正突变基因即在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。具体做法是取出患者体细胞，对不正常的基因进行修饰,使之成为正常的基因,然后将改造后的细胞送回患者体内。这是理论上较理想的基因治疗策略，但实际应用中还存在不少问题。二是间接疗法，即以正常基因替代致病基因，导入外源正常基因，代替有缺陷的基因。对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的基因。我国对B型血友病患者的治疗就是采取的后一种方法。直接和间接法均是用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。与基因转移的受体细胞不同，基因治疗有2种途径：体细胞基因治疗和生殖细胞基因治疗。体细胞基因治疗是指将正常基因转移到体细胞,使之表达基因产物以达到治疗目的。该治疗不必矫正所有的体细胞,只涉及体细胞的遗传改变并不影响下一代,故已被广泛用于严重疾病的治疗。生殖细胞基因治疗是指将正常细胞基因转移到患者的生殖细胞（精细胞，卵细胞早期胚胎）使其发育成正常个体。这是理想的治疗方法，从根本上治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中播散。但实际上这种靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展。原因是其基因转移效率不高，只能用显微注射方法，且仅适用于排卵周期短而次数多的动物,所以很难适用于人类。加之由于受精卵或早期胚胎细胞的遗传改变势必会影响后代,伦理学上的分歧也使生殖细胞基因治疗举步维艰。 目前基因治疗的策略包括基因替代、基因修正、基因增强、基因抑制和基因失活,这些无一例外的均需要基因转移。目前基因转移的方法有物理、化学和生物三大类，其中生物转移在人