植物细胞工程.ppt.ppt

2.1植物细胞工程 1．影响因素 (1)内部因素：材料的选取。 (2)外部因素：营养成分的种类及配比； 植物激素的用量及使用顺序； pH、温度、光照等。 *  专题2 细胞工程 考 纲 下 载 植物组织培养 Ⅱ 动物细胞培养和体细胞克隆 Ⅰ 3. 动物细胞融合和单克隆抗体 Ⅱ 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平或细胞器水平，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。 细胞工程 应用的原理和方法 研究的水平 研究的目的 细胞生物学和分子生物学 细胞整体水平或细胞器水平 按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品 按操作对象分类 植物细胞工程 动物细胞工程 所采用技术的理论基础 植物细胞工程 通常采用的技术手段 植物组织培养 植物体细胞杂交 植物细胞的全能性 1、组织培养的概念 2、组织培养的理论基础 3、组织培养的实例 （一）植物组织培养 1、组织培养的概念 植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 ①植物组织培养的大致过程 离体的器官、组织或细胞——脱分化成愈伤组织——再分化为根和芽——完整植株 ②什么是脱分化、再分化？愈伤组织细胞的状态如何？ 由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。或者叫做去分化。 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官．这个过程叫做再分化。 愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。 消毒：是指用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。常用方法有化学药物消毒法如70%的酒精、紫外线、巴氏消毒法等。 灭菌：是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。常用方法有灼烧灭菌（接种工具）、干热灭菌（玻璃器皿）、高压蒸汽灭菌（培养基及分装的器皿） ④无菌技术 ③植物组织培养需要的条件 无菌、离体、一定的营养物质、激素和适宜的条件等 ⑥激素 生长素、细胞分裂素等 ⑦其它条件 pH、温度、光照等 ⑤营养 大量元素和微量元素，维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇以及蔗糖等。 2、组织培养的理论基础 植物细胞具有全能性 因为每个体细胞都是由受精卵经有丝分裂产生的，因此细胞核中都含有本物种的全部遗传信息，因此它有发育成完整植株的潜能。在离体并在一定的营养物质、植物激素和其它外界条件下，表现出全能性，发育成完整的植株。高度分化的动物细胞不再具有全能性，但有实验证明其“核”仍具全能性. 受精卵生殖细胞体细胞;植物细胞动物细胞 组织培养实例 1．菊花组织培养过程 第一步：制备MS培养基 营养和激素：大量元素和微量元素，维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇以及蔗糖等营养和生长素、细胞分裂素（菊花茎段易培养，可以不用） 琼脂：凝固剂 灭菌：高压蒸汽灭菌 第二步：外植体消毒 外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。 消毒：70%的酒精和0.1%的氯化汞，用无菌水清洗 第三步：接种 消毒：工作台和工作人员的手用70%的酒精消毒 灭菌：接种工具用灼烧灭菌法，每次使用后都要进行 第四步：培养 在无菌箱中，定期消毒，18—22摄氏度、每日照光12小时 接种的操作过程在酒精灯旁进行 第五步：移栽 第六步：栽培 一、影响植物组织培养的因素及成功的关键 2．获得成功的关键 (1)植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差，对培养条件要求较高。 (2)培养材料一旦被微生物污染，就会导致实验失败。原因是微生物增殖快，生长迅速，消耗养分多，并产生代谢废物毒害培养材料。 (3)无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒灭菌。 消毒、灭菌的方法： 培养基：用高压蒸汽灭菌 接种工具：酒精灯火焰灼烧灭菌 外植体：酒精、氯化汞消毒 接种台：70%的酒精消毒 工作人员：70%的酒精消毒 用量比例不同，结果也不同： 二、植物激素在组织培养过程中的重要作用 1．植物组织培养是指 A．离体的植物器官或细胞培育成愈伤组织 B．愈伤组织培育成植株 C．愈伤组织形成高度液泡化组织 D．离体的植物器官、组织或细胞培养成完整植物体 2．下列属于组织培养的是 A．花粉培育成单倍体植株 B．芽发育成枝条 C．根尖分生区发育成成熟区 D．未受精卵发育成植株 D A 3．下列关于细胞全能性的叙述中，错误的是 A．理论上，