第六章微生物的生长及其控制技术分析.ppt

生长：生物个体物质有规律地、不可逆增加，导致个体体积扩大的生物学过程。 繁殖：生物个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。  微生物生长： 在一定时间和条件下细胞数量的增加（微生物群体生长），在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与研究大生物时有所不同。 微生物生长：单位时间里微生物数量或生物量的变化。 第一节　微生物的生长和测定方法 1、测生长量：（1） 直接法：测体积、称干重等方法（2） 间接法： A比浊法：可用分光光度法对无色的微生物悬浮液进行测定或用带有侧臂的三角烧瓶作原位测定。 B生理指标法： 如测含氮量：一般细菌的含氮量为其干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.5%，含氮量乘以6.25即为粗蛋白含量。 测含碳量以及测磷、DNA、RNA、ATP、DAP（二氨基庚二酸）、几丁质或N－乙酰胞壁酸等含量的； 产酸、产气、耗氧、粘度和产热等指标，有时也应用于生长量的测定。 2、计繁殖数： 细菌 酵母菌 放线菌和霉菌孢子数 （1）直接法：指用计数板（例如血球计数板）在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。 A 平板菌落计数法： 采用培养平板计数法要求： 每一活微生物单细胞在培养平板上培养后，形成一个单菌落，在科研中一般用菌落形成单位（colony forming units，CFU）来表示，而不是直接表示为细胞数。 技术要求高，烦琐。 C 厌氧菌的菌落计数法： 一般采用亨盖特滚管培养法进行（第四节）。 半固体深层琼脂法 第二节：微生物的生长规律 一、 细菌的同步生长和二次生长同步培养：使群体中的细胞处于比较一致的生长发育阶段，即大多数细胞能同时进行生长或分裂的培养方法。 同步生长：以同步培养方法使细胞群体中各个体处于分裂步调一致的生长状态。 通过同步培养方法获得的细胞被称为同步细胞或同步培养物。 由于细胞的个体差异，同步生长往往只能维持2-3个世代，随后又逐渐转变为随机生长。 二、单细胞微生物的典型生长曲线 纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中，定时测定菌体数量，以活菌数对数为纵坐标，以时间为横坐标绘图所得到的曲线，称为微生物的典型生长曲线。 整个典型生长曲线可分为四个时期：延滞期、指数期、稳定期和衰亡期。 1、 延滞期表现：不立即繁殖，菌数几乎不变，细胞形态变大。特点：生长速率常数为0，分裂迟缓，合成代谢活跃，体积增长快，细胞内RNA含量增高，对外界不良环境敏感，合成各种新的酶系和中间代谢产物。 原因：缺乏分解或催化有关底物的酶或辅酶或中间代谢物。 影响延滞期长短的因素： 菌种接种龄 接种量培养基成分 2、指数期：在生长曲线中，细胞数以几何级数增长的时期。 表现：代谢活性最强，几何级数增加，代时最短，生长速率最大。特点：生长速度常数最大，细菌数目增加与原生质总量增加，与菌液浊度增加呈正相关性。代时：单个细胞完成一次分裂所需时间，亦即增加一代所需时间。 倍增时间：原生质增加一倍所需的时间 原因：营养丰富 3、稳定期 表现：新增殖细胞数与老细胞的死亡数几乎相等，活菌数动态平衡。 特点：生长速率常数为0，细胞总数最高。合成各类次生代谢物。 原因：养分减少；营养物比例失调，有毒代谢物产生，培养环境条件中pH和氧化还原电位等对细菌生长不利。 4、衰亡期 表现：出现 “负生长 ”，有些细胞开始自溶。衰亡期特点：R为负值，细菌代谢活性降低，细菌衰老并出现自溶，产生或释放出一些产物，如氨基酸、转化酶、外肽酶或抗生素等。 细胞呈现多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊，有些革兰氏染色反应阳性菌变成阴性反应等。 三、微生物的连续培养 　 连续培养（continuous culture）：指向培养容器中连续流加新鲜培养液，使微生物在液体培养物长期维持稳定、高速生长状态的一种溢流培养技术。 又称开放培养，是相对单批培养、封闭培养而言的。  单批培养（batch culture）或 封闭培养（closed culture）：指将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获。典型生长曲线。 单批培养（封闭培养）：培养基一次加入，不予补充，不再更换。 连续培养：在培养过程中不断的补充营养物质和以同样的速率移出培养物才能实现微生物连续培养。 1、恒浊器：是一种根据培养器内微生物的生长密度，并借光电控制系统来控制培养液流速，以取得菌体密度高、生长速率恒定的微生物细胞的连续培养器。 2、恒化器:是一种设法使培养液的流速保持不变，并使微生物始终在低于其最高生长速率的条件下进行生长繁殖的连续培养装 置。 连续发酵与单批