第十二章生物化学肝功能技术分析.ppt

生物化学检验 主讲：钱静 第十二章 肝功能检验 第一节 概 述 第二节 某些肝疾病 的临床生化 第三节 肝功能试验 第四节 肝功能试验 选择原则 第三节 肝功能试验 一、血清（浆）蛋白测定 清蛋白（Alb)是血浆中主要的蛋白质,合成清蛋白是肝的重要功能之一。同时测定血清中的总蛋白（TP）和清蛋白含量，计算球蛋白（G）量和A/G比值是判定肝功能的重要指标。 血清总蛋白测定方法有化学法、物理法、染料结合法、电泳法等临床上常用的是双缩脲法。清蛋白测定常用方法为染料结合法，常用的染料有溴甲酚绿和溴甲酚紫。血中蛋白质主要由清蛋白和球蛋白组成而其他组分的蛋白含量低所以对同份血清测定的总蛋白、清蛋白结果可以求出可以求出球蛋白的含量，通过计算求出A/G。 第四节 肝功能试验的用途及评价 本章小结 金氏法测定血清碱性磷酸酶 ALP在碱性条件催化磷酸苯二钠水解，释放出酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色的醌类化合物，根据红色的深浅与校准酚比较，确定ALP的活性。 原理: 参考范围： 单位定义： 灵敏度较高，显色稳定，不需去蛋白，操作简单、快速准 确度和精密度都较低,受胆红素和溶血的干扰 方法评价： 100ml血清在37℃与底物作用15min，产生1mg酚为1个金氏单位 成人 3～13金氏单位，儿童 5～28金氏单位 速率法测定血清碱性磷酸酶 原理: 以对-硝基苯酚磷酸钠（4-NPP）为底物， AMP或二乙醇胺（DEA）为磷酸酰基的受体。在碱性条件下，ALP催化4-NPP水解释放出磷酸基团，生成游离对-硝基酚（p-nitrophenol, 4-NP），4-NP在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出清ALP活性单位。 计算： 参考范围： 40～160 U/L （37℃） 灵敏度高、线性范围宽（500U/L以上）和精密度高 方法评价： 二、碱性磷酸酶测定的意义 分布：广泛存在于各器官组织中，尤以肝脏、骨骼、小肠和肾脏含量较高，血清中ALP主要来自肝脏和骨骼 病理性增高： 肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌 骨骼疾病：佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期 生理性增高：妊娠期与儿童生长发育期 第四节 血清γ-谷氨酰转肽酶测定 一、测定方法简介 γ-谷氨酰基转移酶（γ-glutamyl transferase，GGT) （一）重氮比色法 （二）速率法 测定方法: 速率法测定血清γ-谷氨酰基转移酶 GGT催化γ-谷氨酰基移换反应。以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物，双甘肽为谷氨酰基的受体，在GGT的催化下，谷氨酰基转移到双甘肽分子上，同时释放出黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性单位 原理： 计算： 参考范围：男性 11～50U/L （37℃），女性 7～32U/L（37℃） ` 方法评价: 本法准确度好；精密度好线性范围宽（460U/L）；操作 简便；但对试剂纯度要求高 重氮比色法测定血清γ-谷氨酰基转移酶 以γ-谷氨酰α-萘胺作为γ-谷氨酰基的供体，双甘肽作为受体，在GGT作用下，产生α-萘胺，后者与重氮试剂反应，产生红色α-萘胺-对-偶氮苯磺酸，其色泽的深浅与GGT活力成正比。 原理： 参考范围： 方法评价： 不需去除蛋白质，操作简便， 颜色稳定，线性关系 好，但底物水溶性较差 成年男性 3～17U/L， 成年女性 2～13U/L 二、γ-谷氨酰转肽酶测定的意义 分布：肾最高，其次是前列腺、胰、肝等器官 尿中GGT活性： 可能有助于诊断肾疾病 血清GGT用于诊断肝胆疾病 1. 原发性或转移性肝癌 2. 阻塞性黄疸 3. 病毒性肝炎和肝硬化 4. 乙醇性肝炎 血清胆红素测定 未结合胆红素 间接胆红素 血清胆红素 结合胆红素 直接胆红素 加速剂常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸钠、尿素。最近在血清中还发现了第三种胆红素，称为δ-胆红素，性质与结合胆红素相似，含量很低。 （一）重氮法 对氨基苯磺酸 ＋ 亚硝酸钠 氯化重氮苯磺酸 ＋ NaCl ＋