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粗茶中茶多糖的提取和测定的分析 　　茶多糖是一类从茶叶提取出来的与蛋白质结合在一起的酸性多糖或一种酸性糖蛋白，具有降血脂、降血糖、增强免疫力、抗辐射、降血压、抗血凝、抗血等功效，是一种极具应用和开发前景的天然产物，可广泛应用于食品、医药、保健等领域。 　　在茶叶的种植和加工生产过程中，大量粗老枝叶和茶叶灰末等副产品常被丢弃，另外由于人们在茶叶消费时追求茶叶的档次，使得中低档茶叶滞销而挤压，造成了自然资源的巨大浪费。如果能从其中提取茶多糖作为保健食品的功能因子，则可变废为宝，为粗茶和中低档茶的综合利用开辟一条新的途径。 　　本试验通过对粗老茶叶中的茶多糖的提取与测定，为粗茶的深度开发和利用提供一定的依据。 　　1实验部分 　　1.1仪器和试剂 　　仪器:722型可见分光光度计(上海光学仪器)，KQ-500VDB双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);超纯水机(南京易普易达科学发展有限公司);电子天平(赛多利斯利科仪器(北京)有限公司)等。 　　试剂:无水乙醇，蒽酮，浓硫酸，葡萄糖，丙酮，无水乙醚等，所用的化学试剂均为分析纯。 　　1.2茶多糖的提取 　　1.2.1工艺流程 　　粗老茶叶-烘干-研磨-温水浸提-过滤-浓缩-乙醇沉淀-静置-离心-无水乙醇、丙酮、无水乙醚交替洗涤-烘干-茶多糖粗成品。 　　1.2.2具体步骤 　　称取10 g粗茶，60 度干燥2 h,磨碎过40-50目筛，温水浸提(80 度 ，80 min， 3次)，过滤，减压浓缩，沉淀剂，95%乙醇沉淀，离心(4000 r/min，10 min)得沉淀物，用无水乙醇、丙酮、无水乙醚交替搅拌洗涤2次干燥(60 度, 4 h),得粗茶多糖，称量。 　　1.3蒽酮-硫酸试液的配制 　　称取0.30 g蒽酮，加100 mL浓硫酸，置于棕色试剂瓶中，摇匀后置于冰箱中。 　　1.4标准曲线的绘制 　　称取无水葡萄糖标准品适量，加蒸馏水配成1.008 mg/mL的标准溶液。精密移取标准溶液1.0. 2.0. 4.0. 6.0. 8.0. 10.0 mL分别置于100 mL容量瓶中，各加水至刻度，摇匀。分别精密移 　　取上述标准溶液各2.0 ml置具塞试管中，以2 mL蒸馏水作空自，每管再加8 mL蒽酮-硫酸试液，立即摇匀，冰水浴冷却。沸水浴中加热7 min，流动水冷却至室温，10 min后在560 nm处测定吸光度，以吸光度(A)对葡萄糖浓度(C)作回归处理，得回归方程:C=105.0383 A-7.2499， r=0.9995 。 　　1.5换算因子的测定 　　精确称取干燥至恒重的茶多糖0.0102 g,溶解后定量转移至25 mL容量瓶中，然后加纯化水定容至刻度，80度水浴加热，再超声1 min增溶，摇匀，制得茶多糖贮备液。用蒽酮-硫酸法测定其吸光度，由回归方程求出贮备液中葡萄糖的浓度，测得其葡萄糖含量，按下式计算换算因子。因茶多糖干燥后在水中溶解性降低，故按1.2.2项下的方法制得多糖提取液取等量两份，经乙醇沉淀洗涤后，一份直接加纯化水溶解(复水性好)，定容，测定吸光度和茶多糖含量;另一份干燥至恒重，称得茶多糖的干重，由二者计算平均换算因子。 　　1.6茶多糖的测定 　　精确称取粗茶叶1g，按照1.2.2项下方法制得茶多糖，然后将制得的茶多糖溶解后定量转移于100 mL容量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，80 度水浴加热，超声1 min增溶，摇匀，制得茶多糖样品液，蒽酮-硫酸分光光度法测定其吸光度，由回归方程计算试液中葡萄糖浓度(C)，按下式计算样品中茶多糖含量。 　　2 结果与讨论 　　2.1茶多糖提取最佳条件选择 　　选择浸提时间、浸提温度、料液比三个因素、三个水平，进行茶多糖提取最佳条件的选择。 　　2.2重复性 　　精确称取粗老茶叶1g，按照1.6项下方法处理后重复测定6次分别计算茶叶多糖含量，RSD=0.54，表明精密度良好。 　　2.3稳定性 　　精确吸取1.6项下制取茶多糖样品液1 mL于具塞试管中，每间隔1h测定溶液的吸光度，RSD=0.23 %(n=5)，在5h内显色稳定。 　　2.4加样回收率 　　精确称取3份粗老茶叶各1g，加入精制茶叶多糖约20 mg，按1.6项下方法测定茶叶多糖含量，计算回收率，回收率范围为98.86%-102.32%。 bxAG 　　3结论 　　本实验采用蒽酮-硫酸法测定粗老茶叶中茶多糖的含量，方法快速、准确、灵敏。由正交设计得出茶多糖提取的最佳工艺，结果表明粗老茶叶中茶多糖含