细说侧脑室微量注射ghrelin对大鼠小肠转运的作用.docVIP

细说侧脑室微量注射ghrelin对大鼠小肠转运的作用 　　脑肠肤ghrelin是由28个氨基酸组成的小分子多肤，在中枢和外周组织均有分布，其受体是生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR) 。Ghrelin的生物学作用比较广泛，可保护胃钻膜，调节能量代谢，可通过中枢和外周机制促进摄食，促进胃排空。新近研究发现，ghrelin与消化道运动关系密切，中枢和静脉注射ghrelin可促进摄食，诱发进食大鼠的禁食期肌电活动.，静脉注射ghrelin可促进胃排空、小肠转运和结肠传输，。我们既往研究也发现，静脉给予ghrelin对禁食大鼠的小肠转运有促进作用Cii7，但中枢注射ghrelin对小肠转运的影响尚未见报道。胃肠道的运动功能与肠神经系统(enteric nervous system, FNS)和中枢神经系统(central nervous system, CNS)密切相关。RUT-ER等发现经腹腔给予ghrelin可增加禁食期大鼠的摄食量，并增加与摄食相关的中枢核团，如弓状核和室旁核的c-Fos蛋白表达量。还有研究发现，经室旁核或侧脑室微量注射ghrelin可促进大鼠摄食，使背内侧核、孤束核、弓状核、室旁核等核团的c-Fos蛋白表达量增加y s。然而中枢微量注射ghrelin对大鼠小肠转运有何影响，能否增加与促消化道运动相关核团的c-Fos蛋白表达，对脊髓的c-Fo s蛋白表达量有何影响，ghrelin对核团c-Fos蛋白表达量的增加作用是否与受体功能相关，目前尚未见报道。中枢微量注射ghrelin对大鼠胃肠道c-Fo s蛋白表达量的影响也未阐明。我们的研究观察了侧脑室微量注射ghrelin对大鼠小肠转运及CNS和FNS的c-Fos蛋白表达的影响，重点分析了与促胃肠动力有关脑区的c-Fos蛋白表达量变化，并研究了受体拮抗剂(D-Lys3)UHRP-6对 ghrelin作用的影响，为阐明ghre-lin的促动力作用提供理论依据。 　　1材料与方法 　　1. 1实验动物 　　健康成年SIB大鼠，雌雄不限，体质量为220--220 g，由西安交通大学医学部动物实验中心提供。 　　1. 2仪器和试剂 　　伊文氏蓝由美国Sigma公司提供，兔抗大鼠c-Fos蛋白抗体由美国Santa Cruz公司提供， UHRP-6由美国Anaspec公司提供，Ghrelin由美国凤凰生物制品有限公司提供，中枢立体定位仪由日本Narishige公司提供。 　　1. 3侧脑室套管 　　置入大鼠禁食8h，腹腔注射100g/I水合氯醛200 mg/kg麻醉，固定于中枢立体定位仪，头部去除毛发，消毒，剪去直径约1 cm面积的皮肤，显露前自，按照SIB大鼠脑立体定位图谱，将中枢套管置人侧脑室。侧脑室坐标(前自后1.Omm，正中线旁开2.Omm，颅骨表面下3. 5 mm)，用牙科水泥和牙托粉固定中枢套管，小螺丝钉加固，橡胶塞封住套管外口。术后3d动物恢复良好，可用于实验。侧脑室微量注射采用5 pI微量进样器，经头部预置的中枢套管注人，注射体积为I，针尖伸出套管末端1 mm缓慢注人，注射后将微量注射器保留2 min，以防止药物回流。 　　1. 4小肠转运试验 　　①置人十二指肠导管。大鼠实验前禁食18h，用100 g/I的水合氯醛200 mg/kg腹腔注射麻醉。整个手术过程严格遵循无菌操作原则。沿腹中线剪开腹壁各层组织，选择距幽门1 cm的十二指肠处为穿刺点，用18G针头经穿刺点穿刺十二指肠肠腔，再经穿刺点插人聚乙烯导管(内径0.7 mm，外径1. 0 mm)，导管一端留置在肠腔内约1 cm，用手术线缝合固定导管。在肩脚间区和右上腹之间用手术钳做皮下隧道，将导管通过皮下隧道固定于肩脚间。术后大鼠置于37℃温室内，之后分笼单独饲养。②测量小肠转运。术后1周将造好的大鼠动物模型禁食22 h，随机分为6组((n=6):生理盐水组，所给药物溶于5pI生理盐水，最后一组大鼠的2次给药间隔时间为15 min。侧脑室微量注射药物或生理盐水后，经十二指肠导管注人。. 1 mI伊文氏蓝溶液，再注人。. 1 mI生理盐水，使十二指肠导管内的伊文氏蓝均进人肠腔。20 min后将大鼠脱颈椎处死，沿腹中线剪开腹壁，用手术线扎紧回盲瓣和幽门，剪取自幽门至回盲瓣的肠管，将肠管放置成直线。操作中避免拉伸肠管，防止肠内容物流动影响观察结果。测量小肠总长度(从回盲瓣到幽门的长度)及染料移行长度(从幽门到染料移行的前端)，计算出小肠转运率。小肠转运率(oo)=巨染料移行的长度(cm)/小肠总长度(cm)}X10000. 　　1. 5染色标本制备 　　大