谈基于腰痛宁胶囊的中药有效部位组方抗炎镇痛活性评价与筛选.docVIP

谈基于腰痛宁胶囊的中药有效部位组方抗炎镇痛活性评价与筛选 　风湿骨病是一种对肌肉、骨骼及软组织造成损伤的慢性疾病，难以根治、反复发作，中医将这类疾病统称为“痹症”，抗炎镇痛是对此类疾病的常用治则。腰痛宁胶囊作为治疗风湿骨病的大品种复方中药，以马钱子为君药，并与具有活血化瘀、抗炎镇痛、增强免疫等功效的麻黄、甘草、苍术、乳香、没药、川牛膝及土鳖虫、全蝎、僵蚕9 味药材，按照一定比例打粉制成胶囊，伴以黄酒吞服。具有祛寒止痛、通经活络、消肿化瘀等功效。其处方药材多且未经纯化精制，影响药物吸收;且其君药马钱子是一种毒性很强的药材，全粉入药存在毒副作用大等问题。对复方中药的药理作用进行系统研究有助于复方中药的改进及在此基础上研发新型中药。 　　本课题组前期在总结153 个风湿骨病处方的基础上，选取腰痛宁胶囊处方中10 味药材以及红花、骨碎补、三七、淫羊藿、人参、独活、桂枝、桑寄生等8 味风湿骨病处方常用药材，提取这18味药材中的有效部位，根据腰痛宁组方原则和组合化学理念设计了27 个不同有效部位组合配方，并进行体外细胞药理学研究。结果发现甘草皂苷、红花黄酮、三七皂苷的抗炎、增强免疫及促进软骨细胞增殖等活性优于其他同类有效部位，并且由25%生物碱+25%黄酮+50%甘草皂苷组合的有效部位配方样品在多个细胞模型下均有良好的或优于腰痛宁全方的药理活性。为降低马钱子生物碱带来的毒副作用，本研究在此基础上，筛选出麻黄生物碱、红花黄酮、甘草皂苷、三七皂苷构成7 个中药有效部位组方，比较其与腰痛宁全方及由腰痛宁处方药材生物碱+黄酮+皂苷组成的腰痛宁拆方及其减毒拆方在缓激肽、纳洛酮受体模型下的体外抗炎、镇痛活性。对体外抗炎镇痛效果较优的组方采用二甲苯致耳肿胀模型、热刺激痛阈模型及醋酸扭体模型评价其体内抗炎镇痛活性，以探究腰痛宁处方的抗炎、镇痛作用机制及其组方优化的可行性，为风湿骨病中药新药的研发提供候选组方。 　　1 材料 　　1.1 动物 　　SD 大鼠，SPF 级，体质量180～200 g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号SCXK(沪)2013-0016;昆明种小鼠，清洁级，120只，体质量(20plusmn;1)g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号SCXK(沪)2012-0002，实验动物质量合格证号2007000561421。动物分组分笼饲养于12 h 明暗交替的环境中，温度为18～25 ℃，相对湿度为(50plusmn;5)%，标准饲料喂养，可自由摄食、饮水。 　　1.2 试剂 　　3H-纳洛酮(American Radiolabeled Chemicals公司，批号31003);盐酸纳洛酮注射液(北京凯因科技股份有限公司，批;蔗糖(国药试剂有限公司，批号ART 070192-02-03);氯化钠( 南汇彭镇营房化工厂， 批);WhatmanGF/B 滤膜(Perkin Elmer 公司，批号476-12241);3H-缓激肽(American RadiolabeledChemicals 公司，批号ART0139-131003);缓激肽(批号SLBH1330V)、牛血清白蛋白(批号A1933)、三羟甲基甲胺基乙磺酸(TES)缓冲液(批号T1375-25g)、杆菌肽锌(批号B5150)、卡拉普利(批号C8856)、二硫苏糖醇(DTT，批号43816)，Sigma公司;二甲苯(国药集团化学试剂有限公司，批;醋酸(上海天莲精细化工有限公司，批;羧甲基纤维素钠(东京化成工业株式会社，批号C0045)。三羟甲基氨基甲烷(Tris，国药集团化学试剂有限公司，批。 　　1.3 仪器 　　Bioc-45R 低速离心机(Thermo 公司);LE-80K超速离心机(Beckman 公司);液闪发光分析仪(Perkin Elmer，Inc.);ML104 分析天平(德国MetterToledo 公司);QL-901 漩涡混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司; CELL150 CO2 培养箱(Thermo);CKX41 倒置显微镜(OLYMPUS);TDZ4-WS 离心机(湖南赛特湘仪);CLASS II 生物安全柜(Labconco)。1.4 药材马钱子Strychnosnux-vomica L.(制马钱子，批号Y302-09091-10)、苍术Atractylode slancea (Thunb.)DC.(批号Y002-101001-2)、麻黄Ephedra sinicaStapf.(批号Y412-100601-12)、土鳖虫Eupolyphagasinensis Walker(批号Y803-