实验四酵母菌形态观察研究报告.ppt

实验四 酵母菌的形态观察 二、基本原理 酵母菌是单细胞真核微生物，大小通常比常见的细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。有性生殖是通过接合产生子囊孢子。 美蓝是一种无毒性的染料，氧化型呈蓝色，还原型呈无色。酵母菌的活细胞新陈代谢作用强，有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。而死细胞或代谢作用较弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。 三、实验材料 1.?菌种：啤酒酵母、面包酵母 2.?培养基：豆芽汁斜面、麦氏培养基 3. 溶液或试剂：0.1%的美蓝染色液、芽孢染色液一套 4.?仪器及其他用具：载玻片、显微镜等 四、 实验内容 1.水浸片法观察酵母菌的死活细胞（啤酒酵母） 载片中央滴一滴0.1%的美蓝染液 无菌操作取菌并将菌体与染液混匀 盖上盖玻片 镜检并绘图 2. 子囊孢子的观察（面包酵母）（两人一组，交换观察） 1）生孢培养：菌种活化接种麦氏产孢培养基，28℃培养48h。 2）水浸片法观察：载片上滴一滴0.1%的美蓝染液，无菌操作取面包酵母与染液混匀 ，盖上盖玻片，镜检并绘图（生活状态下的子囊孢子） 3.放线菌的插片培养（每组2皿） 插片培养法：倒平板（将高氏合成1号培养基无菌操作倒平板，厚于平时所倒平板） 插片（将无菌的盖玻片以大约45°角插入培养基中（8片/皿/组） 接种（无菌操作取灰色链霉菌或紫色链霉菌划线接种于插片和培养基接触处） 培养皿底部贴标记 培养（将插片平板倒置，28℃培养3~5天） 4.霉菌小培养法的准备（每人一套） 培养小室的准备和灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，160-170℃干热灭菌2h。 五、实验结果 1.绘制啤酒酵母的菌体形态和无性繁殖方式（芽殖），示芽体、营养体及死活细胞。 死细胞涂黑表示，活细胞打上虚点表示 2.绘制面包酵母的有性繁殖方式（子囊孢子），示子囊孢子、营养菌体。 下次实验内容 放线菌的形态观察—— 插片法 六、 思考题 1. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌P43 ，2（2） 2. 如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子P44，2 上次试验习题解答 1.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节？ P28，2（1） ① 载玻片要洁净无油迹，制片时取水和菌量不宜过多，涂片时应均匀涂开呈一薄层。 ② 热固定温度不宜过高（酒精灯火焰上方3～4次），否则会改变甚至破坏细胞形态。 ③ 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的侧面或背面流下。水流不宜过急、过大，以免涂面薄膜脱落。 2.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？P28，2（2） 制片未完全干燥就滴油观察，水油不相混溶，视野易滑动而无法清晰观察。 3.你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？P30，2（1） ① 菌龄：要用活跃生长期的幼龄培养物 ② 涂片：不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性 ③ 火焰固定：不以过热（酒精灯火焰上方3～4次） ④ 脱色程度 革兰氏染色乙醇脱色程度为实验成功的关键步骤。脱色不足，阴性菌误认为阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时间一般为30s。 4. 说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌芽孢？P 32，2（1） ① 芽孢染色的原理：细菌的芽孢壁厚、不易染色亦不易着色，用着色力强的染色剂孔雀绿通过加热或延长染色时间而使菌体和芽孢着色，菌体的染料经水洗后已被脱色，而芽孢一经着色就不易被洗脱，再经番红复染后，芽孢仍保留初染液的绿色，而菌体和芽孢囊被染成复染液的红色。 ② 用简单染色法可以观察到细菌的芽孢，芽孢成无色透明状。 3）染色法观察：制片(涂片、干燥、固定) 孔雀绿初染10min 95%乙醇脱色20s 水洗 番红复染5min 水洗干燥镜检 (子囊孢子蓝绿色、营养细胞和子囊壁呈红色) 染色法注意事项： 1）制片前载玻片在火焰上烤一烤，去除油脂。 2）取菌不要太多（水滴呈浅白色） 3）固定时不可离火焰太近（菌体崩解） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 接种位置 插片顺序 示范试管接平板技术 请确保镜头擦拭干净！ 一、目的要求 1.学习并观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌的死活细胞的试验方法和子囊孢子