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酶的发展史 公元前12世纪周代人们就会酿酒，制作饴糖和酱；2000多年前，春秋战国时期用曲治疗消化不良的疾病。 1810年Jaseph Gaylussac发现酵母可将糖转化为酒精。 1857年，Pasteur认为发酵是活细胞活动的结果； 1878年, Kuhne给酶一个统一的名词，叫Enzyme，这个字来自希腊文，其意思“在酵母中”。 1897年，Buchner兄弟制备了不含酵母细胞的抽提液使糖发酵，说明发酵与细胞的活动无关。从而说明了发酵是酶作用的化学本质，为此Buchner获得了1911年诺贝尔化学奖。 1926年，Sumner从刀豆中提取得到脲酶的结晶,证实酶是一种蛋白质；获1949年化学诺贝尔奖. 80年代初发现了具有催化功能的RNA——核酶(ribozyme)，这一发现打破了酶是蛋白质的传统观念，开辟了酶学研究的新领域，获1989年化学诺贝尔奖. 现已鉴定出4000多种酶，数百种酶已得到结晶，而且每年都有新酶被发现。 酶的化学本质是蛋白质的主要依据是： ① 酶经酸碱水解后的最终产物是氨基酸，酶能被蛋白酶水解而失活； ② 酶是具有空间结构的生物大分子，凡使蛋白质变性的因素都可使酶变性失活； ③ 酶是两性电解质，在不同pH下呈现不同的离子状态，各自具有特定的等电点； ④ 酶和蛋白质一样，具有不能通过半透膜等胶体性质； ⑤ 酶也有蛋白质所具有的化学呈色反应。 辅酶和辅基 1、辅酶和辅基的区别 2、辅酶和辅基的功能 本质：小分子有机化合物 具有氧化还原性或转移基团的能力 第二节 酶的结构和功能 一、酶的活性中心 必需基团： 酶的活性中心特点： 1、体积小 2、具三维结构的裂隙 3、底物与酶活性部位是通过次级键结合 4、活性部位的裂隙具有高度疏水性 5、活性部位构象上的柔性 ⑤酶活性中心的微环境效应 胰凝乳蛋白酶分子中催化三联体构象 胰凝乳蛋白酶反应的详细机制（1） 胰凝乳蛋白酶反应的详细机制（2） （一）中间络合物学说 米氏方程的推导： (二)米氏方程的讨论 4. 当?= Vmax／2时，Km=[S]。因此，Km等于酶促反应速率达最大值一半时的底物浓度。 1、Km的含义（ 等于酶促反应速度达最大值一半时的底物浓度）。 2、是酶在一定条件下的特征物理常数，通过测定Km的数值，可鉴别酶。 3、Km可用来判断酶的最适底物(天然底物)。 4、Km可以反映酶与底物亲和力的大小。Km越小，酶与底物的亲和力越大。 5、 Km与 Ks 6、①若已知酶的Km值,可计算某一底物浓度时,反应速率相当于Vmax的百分率。 例如,当[S] = 3Km时,代入米氏方程式,求得当?= 0.75Vm ②在可逆反应中,两个Km值中最小的反应方向是该酶促反应的主要方向。 ③如果代谢途径各酶的Km已知, Km值最大的酶是限速酶 。 （四）Km和Vmax的测定 1. Lineweaver-Burk双倒数作图法： ①临床上低温麻醉是利用酶的性质减慢组织细胞代谢速度，提高机体对氧和营养物质缺乏的耐受性。 ②保存菌种。 ③生化实验中测定酶的活性，应严格控制反应液的温度。 ④酶制剂应保存在冰箱中，取出应立即应用，以免变性。 当反应系统中底物的浓度足够大时，酶促反应速度与酶浓度成正比，即ν=k[E]。 1、不可逆抑制作用 a. 竞争性抑制剂往往是酶的底物类似物或反应产物； b. 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同； c.抑制剂浓度越大，则抑制作用越大；但增加底物浓度可使抑制程度减小； d.动力学参数：Km值增大，Vm值不变。 a.非竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； b.底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合； c.抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响； d.动力学参数：Km值不变，Vm值降低。 a.反竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； b. 抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合； c.必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用；抑制程度随底物浓度的增加而增加； d.动力学参数：Km减小，Vm降低。 酶的纯度鉴定（p258） 每次比活力 纯化倍数= ——————— 第一次比活力 每次总活力 回收率= ———————x100% 第一次总活力 2．V与[E] 关系的几点讨论 七、激活剂对酶反应速度的影响 什么是激活剂（activator）? 酶的激活剂：凡能