食品微生物实验课件.pptVIP

实验一 培养基的配制、分装和灭菌 了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类； 掌握配制培养基的一般方法和操作步骤； 懂得高压蒸汽灭菌的基本原理及使用注意事项； 了解几种常用灭菌方法。 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。 从培养基的物理状态可分为: 1. 液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2. 固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3. 半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 灭菌:是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。 间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。 紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。 化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。 1. 药品和试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％ NaOH 溶液、10％盐酸溶液。 2. 器材 天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、 PH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。 培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌 培养基的制备过程配方及配量---称取药品----加热溶解----调节pH ----过滤----分装----加棉塞----包扎----灭菌----搁斜面----贮存 2. 溶解 在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 3. 调节pH值 用玻璃棒沾少许液体，测量pH值。用1mol/L氢氧化钠和1mol/L盐酸调节pH。 4. 加琼脂溶化： 加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 5. 分装： 根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。 6. 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 7. 灭菌： 高压蒸汽灭菌，121℃，20min 8. 搁斜面： 9. 贮存:培养基灭菌后必须在37 ℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品； 蛋白胨极易吸湿，称取动作要迅速； 配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时， 再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，要求 不断搅拌，以免糊底，并防止沸腾外溢； 分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量 约为管高的1/5，液体培养基约为管高的1/4，三角瓶不 超过瓶体的1/2 ； 分装时不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免引起污染。