细胞生物学-细胞周期的调控 -2幻灯片.pptVIP

1988年Maller实验室的 J. Lohka 纯化了爪蟾的MPF，经鉴定由32KD和45KD两种蛋白组成，二者结合可使多种蛋白质磷酸化。 细胞周期基因的发现 Paul Nurse和美国科罗拉多大学的Maller合作证明（1990）证明P32实际上是CDC2的同源物。 cyclinB/A与CDK1结合，CDK1使底物蛋白磷酸化、如将组蛋白H1磷酸化导致染色体凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体等下游细胞周期事件 （二） M期周期蛋白与分裂中期向分裂后期转化 细胞周期运转到中期后，M期周期蛋白A和B降解，CDK1激酶活性丧失，蛋白去磷酸化，由中期向后期转化。 M期周期蛋白N端有破坏框。在中期当MPF活性达到最高时，通过一种未知的途径，激活泛素酶复合物，将泛素连接在M期周期蛋白上，导致其被蛋白酶体降解. 1.泛素的羧基端通过与泛素激活酶(E1) 的半胱氨酸残基形成硫酯键而激活。 2.泛素从E1转移到泛素结合酶(E2) 的半胱氨酸残基。 3.E2和泛素连接酶(E3)一起将泛素转移到底物蛋白的赖氨酸残基, 在那里进行泛素的聚合化,最后作为蛋白酶体的降解底物, 被快速降解。 泛素加到周期蛋白上需要三种不同的酶介导: 泛素连接酶(E3)又称为后期促进复合物(anaphase-promoting complex,APC) 至少有8种成分组成，分别称为APC1至APC8。APC可以促使M期周期蛋白泛素化途径降解，此外也调节其他一些与细胞周期调控有关的非周期蛋白类蛋白质的降解。 　　 后期促进因子APC活性的受到多种调节。 首先，APC活性受MPF的调节。 其次， APC 受到Cdc20的正调控； Cdc20位于染色体的动粒上. 在未被被动粒微管捕捉的动粒上Mad2 蛋白与Cdc20结合抑制其活性 若动粒被动粒微管捕捉,则Mad2从动粒上消失,对Cdc20的抑制解除,促使APC活化，纺锤体装配不完全，或所有动粒不能被动粒微管全部捕捉，APC则不能被激活。 纺锤体装配检验点 （三） G1/S期转化与G1期周期蛋白依赖性CDK激酶 细胞由G1向S期转化受G1期周期蛋白依赖性激酶所控制： G1期激酶：CDK4、CDK6 G1期周期蛋白：cyclin D, E。 cyclin D 的合成对细胞生长因子有强烈的依赖性 Rb bind with E2F transcription factor Rb是G1/S期转化的负性调控因子,在G1晚期通过磷酸化而失活 Rb蛋白磷酸化→与之结合的转录因子（E2F）释放→S期所需的基因转录的阻断被解除→细胞进入S期； * 第二节 细胞周期的调控 MPF的发现及其作用 细胞周期运转的调控 卵细胞促成熟因子, matuation-promoting factor 细胞促分裂因子, mitosis-promoting factor M期促进因子, M-phase-promoting factor 一、MPF的发现及其作用 Johnson和 Rao(1970)将Hela细胞同步于不同阶段，然后与M期细胞混合，在灭活仙台病毒介导下，诱导细胞融合。 结果---- ------使间期细胞出现类似于有丝分裂期的形态变化：染色质凝集，核被膜破裂及核仁消失，将这种现象叫做染色体超前凝集(premature chromosome condensation)。 Meaning? M期细胞具有某种促进间期细胞进行分裂的因子，即细胞分裂促进因子(maturation promoting factor，MPF)。 人M期细胞与袋鼠（Ptk）G1、S、G2期细胞融合诱导PCC 卵细胞提取物注射实验 Masui和Markert在体外用孕酮诱导非洲爪蟾的卵母细胞成熟 Meaning? ：孕酮诱导卵母细胞成熟；成熟卵细胞质中，含有卵母细胞成熟的因子，即促成熟因子MPF （maturation promoting factor） 。 用成熟卵母细胞的细胞质注射到卵母细胞，发现可以促进卵母细胞成熟。 MPF的纯化 Leland Hartwell 七十年代初，美国西雅图的华盛顿大学 Leland Hartwell， 以芽殖酵母为实验材料，利用阻断在不同细胞周期阶段的温度敏感突变株，分离出了几十个与细胞分裂有关的基因(cell division cycle gene，cdc)。他发现的一群基因，成为八十年代和九十年 代人们研究细胞周期的主要对象。如芽殖酵母的cdc28基因，在G2/M转换点发挥重要的功能。 也在七十年代 ，英国牛津大学的 Paul Nurse ，用另外一种酵母裂殖酵母为实验材料，同样发现