第四章微生物的生长与环境条件选读.ppt

第四章 微生物的生长与环境条件 重点:微生物生长规律,微生物的生长与环境的关系. 难点:微生物的生长规律. 第一节 测定生长繁殖的方法 生长与繁殖的概念 生长——微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。 繁殖——生命个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 发育——从生长到繁殖，是生物的构造和机能从简单到复杂、 从量变到质变的发展变化过程，这一过程称为发育。 个体生长——微生物细胞个体吸收营养物质，进行新陈代谢，原生质与细胞组分的增加为个体生长。 群体生长——群体中个体数目的增加。可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。（由于微生物的个体极小，所以常用群体生长来反映个体生长的状况）个体生长?个体繁殖? 群体生长 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖 一 微生物数量的测定 （一）总菌数的测定 1 血球计数板测定法 (教材P95) 优点:简单快捷 缺点：测定经过偏高 (?) 2 比浊法:根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。 注意：培养液的颜色不能太深 (?) 优点：简便，直接。 （二）活菌落的测定（测定单细胞微生物的数量） 1 平板菌落计数法 菌落（个）/ml= *稀释倍数 原理：一个菌体形成一个菌落 2 稀释培养法(MPN)(教材P96) 二 测定细胞物质的重量 1 称重法:用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。　　 优 点：简单可靠。 适用范围：菌体浓度高，不含其他干物质 2 蛋白质测定法:根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。 原理：（1）微生物蛋白质含量稳定 （2）氮是蛋白质的稳定成分 (蛋白质量=6.25×总含N量) 优点：测定准确。  二 获得纯培养的方法 （一）稀释分离法 1.稀释平皿分离法 2.平皿划线分离法 3.单细胞挑取法 （二）选择培养基 （三）病原微生物的分离 思考： 1 划线分离法的原理是什么？ 2 每次化线后都要烧掉接种针上残留的菌住，为什么? （三） 病原微生物的分离 将病原微生物接种在易感宿主上，从感染后的宿主病组织中可分离到该种微生物。 四 微生物群体生长规律 1 分批培养（P99） （1）分批培养的概念 采用完全封闭的容器，一次接种，静置培养。（不更换培养基的培养方法） 特点：固定的营养物质 结果：细菌在一个容积有限的环境中不可能无限制地高速生长。分批培养中细菌的生长在短期内表现明显的规律性-------细菌的生长曲线 延滞期(滞留适应期) 特点 生长速率常数R = 0 细胞形态变大或增长 细胞内RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈碱性。 合成代谢活跃，易产生诱导酶。 对外界不良条件反应敏感 影响因素 菌种特性、接种龄、接种量、培养基成分 思考:研究滞留适应期长短的意义 对数期(指数生长期) 特点 R最大，增代时间（代时G）或倍增时间最短。 细胞进行平衡生长，菌体内各种成分最为均匀。 酶系活跃，代谢旺盛。 影响因素 菌种特性、营养成分、营养物浓度、培养温度 稳定期(最高生长量期) 特点 R = 0，菌体产量达到最高点。 细胞开始储存糖原、异染颗粒和脂肪等储藏物。 以生产菌体或与菌体生长相平行的代谢产物的最佳收获期。 稳定期到来的原因 营养物尤其是生长限制因子的耗尽； 营养物的比例失调； 有害代谢产物累积； pH、氧化还原电势等物化条件不适宜。 思考:细菌数量增加率为0的原因? 衰亡期 特点 个体死亡速度 新生速度，群体呈现负生长； 细胞形态多样； 细胞产生自溶； 产生或释放抗生素； 芽孢杆菌中芽孢的释放。 衰亡期到来的原因 环境条件越来越不利，从而引起细胞内分解代谢大大超过合成代谢，导致菌体死亡。 连续培养 概念：当一定培养器内的微生物生长到对数期(指数期)后期时，以一定的速度连续流进新鲜的培养基，有以同样的流速不断流出培养物，使培养物达到动态平衡，其中的微生物长期保持在对数期和稳定的生长速率上。 装置：连续培养器 连续培养的优缺点 优点 高效、自控 节约了大量动力、人力、水和蒸汽 产品质量较稳定 缺点 菌种易于退化 易遭杂菌污染 营养物的利用率低 3 同步生长：细胞群体处于分裂步调一致的状态。 获得同步生长的方法 环境条件诱导法 改变环境条件，用控制温度、光线、培养基成分、或者用能够影响细胞周期中主要功能的代谢抑制剂等