高等植物有性杂交2选读.ppt

实验十、高等植物有性杂交 一、实验目的 理解小麦、水稻等高等植物有性杂交的原理。 了解小麦、水稻的花器构造，开花习性，授粉，受精等有性杂交知识。 掌握小麦或水稻有性杂交技术。 学习花粉活力的测定方法 二、实验原理 植物有性杂交是人工创造新的变异类型最常用的有效方法，也是现代植物育种上卓有成效的育种方法之一。 通过将雌雄性细胞结合的有性杂交方式，重新组合基因，借以产生各种性状的新组合，从中选择出最需要的基因型，进而创造出对人类有利的新种。 三、实验用品 试材：可根据实验要求准备试材，如：大白菜、甘蓝、小麦、水稻、大葱、菠菜等。 用具：镊子、授粉器、放大镜、指形管（或小玻璃瓶）、干燥器、培养皿、花粉筛、剪刀、75%酒精棉球、纸袋、纸牌、铅笔等。 四、实验方法 (1)选穗 选择发育良好、健壮、具有本品种特征的主茎穗或大分蘖穗作母本。 用镊子打开穗中部两侧的小花，检查其花药，若为绿色，这样的穗在去雄后第2-3天授粉最易成功。花药过嫩时去雄容易损伤花器，过老时去雄花粉囊易裂散粉而发生自交。在实际操作中去雄的穗子宁可嫩些不可过老。 (2)整穗：母本穗选定后，先用镊子去掉穗子上下部发育不好的小穗，仅留中部5-6对大的小穗，再将所留小穗中上部的小花除去，每小穗只保留基部两朵发育最好的小花，剪去芒。 (3)去雄（剪颖去雄法）：在整穗时要把去雄花朵的护颖和内外颖剪去五分之二，然后从剪口中把花药用镊子取出。此法去雄较快，但要注意勿损伤柱头。 去雄后套上透明纸袋，纸袋下部开口沿穗轴折合，用大头针别住，防止自然杂交。注意不要别住剑叶。然后挂上标牌，用铅笔写上母本名称、去雄日期、操作者学号或姓名。 (4)采粉及授粉：当去雄花朵的柱头呈羽毛状分叉并带有光泽时，表明柱头已经成熟，应即进行授粉。授粉工作一般在去雄工作后的第二天上午8点以后或下午4点以前进行。如去雄后遇到阴雨天，温度较低，可在去雄后3-4天进行授粉。 正在散粉 选将要开花小穗的父本穗为供粉穗。将供粉穗取下剪颖，使其花药露出来，促其散粉。 取花粉 授粉 套袋 把剪颖去雄的隔离纸袋的顶端剪成敞口，而后把散粉的供粉穗从敞口处插入纸袋，凌空捻转数下，使花粉散落于柱头上，然后将供粉穗取出或不取出，纸袋口用大头针别合。纸牌上写明父本名称和授粉日期。 (5)授粉情况检查：小麦授粉后1-2小时，花粉粒就在柱头上开始萌发。约经40多小时就可以受精。在受粉后的第3-4天可以打开纸袋检查子房的膨大情况。如果子房已膨大，内外颖合拢，说明已正常受精。如果内外颖仍然开张子房不见膨大，说明未能受精。受精后一般不需要继续隔离，可以除去纸袋。但为了防止意外损失和收获时易于辨认可以不除去纸袋，连同母本穗一起收回。 (6)收获：按组合收，写明组合名称、种子粒数，保存好以备播种。 小麦花器构造 水稻花器构造 实验目的 在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。 花粉活力的测定（设计性） 一、花粉萌发测定法 1、原理 正常的成熟花粉具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。 2、器材与用具 载玻片;显微镜;玻棒;恒温箱;培养皿;滤纸。 3、试剂 培养基(不同浓度的蔗糖，硼酸，PEG等)。 4、方法 取即将散粉的花药置于1.5 ml离心管中，每个离心管中置2枚采自不同小花的花药，以降低花粉发育时期不同给试验造成的误差。 在离心管中加入等量(均为4滴) 新配制的培养液，用镊子夹破花药，释放出花粉粒，扣上离心管盖子，分别在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃条件下培养30 min，培养后放在1～4℃冰箱中保存。 取适量培养后的花粉滴于载玻片上,加盖盖玻片, 用显微镜(10×10)观察花粉萌发及花粉管长度情况。 花粉萌发以以花粉管长度大于花粉粒直径为准。每个玻片观察3～5个视野，统计萌发率，所有试验均重复3次，各处理每次统计100个花粉粒以上。 萌发率=萌发花粉粒数目/ 观察花粉粒总数×100 % 萌发的花粉 二、碘—碘化钾染色测定法 1、原理 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。 2、器材与用具 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。 3、