超高效液相色谱串联质谱法测定苹果和土壤中阿维菌素的残留量.doc

超高效液相色谱串联质谱法阿维菌素苹果和土壤中的李增梅1，邓立刚1，赵淑芳2，郭长英1，赵善仓1，毛江胜11 1（农业部食品质量监督检验测试中心，济南 2501002（山东省食用菌工作站，济南 250102） 摘 要 建立了土壤中阿维菌素残留量的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法，并且应用该方法测定了阿维菌素在泰安、西安、北京三地苹果和土壤中的代谢规律。样品经乙腈萃取后，用饱和NaCl层析分层，静置30 min后，旋转蒸发浓缩，UPLC-MS/MS选择多反应监测（MRM）正离子模式测定。该方法最低检出浓度为1.0 μgkg（S/N=10）；在2.0~100.0 μgL范围内阿维菌素的峰强度与质量浓度的线性关系良好（r0.9994）。1.0、10、100 μgkg三个添加水平，回收率在7.2~96.1%，相对标准偏差在3.18~9.14%。田间测定试验结果表明：阿维菌素在苹果中的原始沉积量在11.8~18.4 μgkg，在土壤中的原始沉积量在44.7~54.8 μgkg，代谢快，在苹果中的半衰期是2.35~3.84天，在土壤中的半衰期是4.58~6.45天。关键词 阿维菌素，，苹果，土壤，残留，消解 阿维菌素是十六元大环内酯类的抗生素类杀虫、杀螨、杀线虫剂，由阿维链霉素经液体发酵加工而成，具有高效、广谱、有效期长、不易产生抗药性等特点，已经作为高毒有机磷农药的替代品而广泛应用。但很多研究表明，阿维菌素对蜜蜂以及土壤生物（如蚯蚓）等有益生物都属高毒甚至剧毒农药[1]，对害虫天敌也具有明显的致死和亚致死效应[]，对哺乳动物的生殖能力也存在着潜在的毒性[]。所以，国际上对阿维菌素的残留限量(MRL)要求很高，中国农业部规定其在柑桔、梨和黄瓜中的MRL为20 μgkg，叶菜和豇豆中为50 μgkg，欧盟规定在果蔬产品、谷物等农产品中MRL值为10 μgkg，食品法典委员会（CAC）规定在苹果、梨、柑橘、瓜类等产品中为10 μgkg [4]。 对于阿维菌素的残留检测方法已有许多探索与研究，但目前应用比较广泛的是以荧光衍生化检测为基础的高效液相色谱法[-6] ，以三氟乙酸酐和N-甲基咪唑作为衍生试剂，利用荧光检测器检测衍生物以定性和定量，该方法操作复杂，衍生化条件要求严格，衍生产物在光线照射条件下极不稳定，降解速率快，检测结果的准确性和重复性差，Kolar等应用液相色谱荧光检测技术检测羊粪中阿维菌素[]，回收率仅在66.4-80.8%，所以许多学者对阿维菌素类药物的残留检测进行了其他方法的探索，近年来，对残留检测的液质方法国内外有大量[8-11]。相比之下，液质检测方法可大大提高目标物质的灵敏度以及回收率，缩短进样时间，提高检测效率。本文应用目前先进的超高效液相色谱-串联质谱仪（UPLC-MSMS），建立阿维菌素的快速、准确检测方法，并应用该方法研究了阿维菌素在苹果和土壤中的代谢降解规律，为该药的田间施用提供指导。 .1 仪器与试剂 ACQUITY Ultra Performance LC超高效液相色谱（美国Waters 公司Micromass Quattro Ultima IMPT质谱仪Waters 公司ACQUITY UPLC BEH C8色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）Waters 公司Waters 公司T25BS2型高速分散匀浆机IKA公司）；3K30型高速离心机Sigma公司）；Laborota 4000型旋转蒸发仪德国Heidolph电子天平0.6 %阿维菌素乳油纯度99.0%东莞市瑞德丰生物科技有限公司甲醇甲酸色谱纯乙腈氯化钠.2 标准配制 精确称取阿维菌素标准品0.0100 g（精确至0.0001 g）于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解后定容，配制成100.0 μgmL贮备溶液，用聚四氟乙烯（PTEE）密封带密封，-20℃避光储存。用甲醇稀释为100、50、20、10、5、2 μgL工作溶液，以制作标准曲线，现配现用。 .3 苹果、土壤消解动态试验 三个小区，小区之间设立隔离带，每个小区不少于2棵树选取30㎡的空白地喷雾施药一次，施药剂量为4.5 mgL（阿维菌素有效成分）对照苹果果实在其成熟个体约一半大小时施药后1小时、1、3、5、7、14、21、30天，随机采集果树的不同部位不少于2公斤，用四分法将其打碎混匀，于-25 ℃冰箱保存待用。随机取5~10个点采集0～10 cm耕作层土壤1000 g以上，充分混匀后过1 mm孔径筛分样，于-25 ℃冰箱保存待用。 .4 样品称取苹果或土壤样品20于200 mL广口瓶中，准确加入50 mL乙腈，苹果样品高速匀浆1 min，土壤样品超声波提取30 min，将提取液过滤至加有5NaCl的具塞量筒中。剧烈震荡量筒，静置30 min，待分层，准确取