在双链DNA中的尿嘧啶是在人类细胞中的底物的核苷酸切口修复途径.docVIP

在双链DNA中的尿嘧啶是在人类细胞中的底物的核苷酸切口修复途径 意义 水解尿嘧啶胞嘧啶脱氨生成一个高度突变的DNA碱基病变被认为是生物体自发突变的主要来源之一。我们报告，人类重大嘌呤/嘧啶（AP）核酸内切酶，APE1，是一种脱氧尿嘧啶核苷核酸内切酶，可以去除尿嘧啶DNA糖基化酶独立核苷酸切口修复途径中残留。这一新的修复古人类在进化上保守的AP核酸内切酶功能，指向一个可能的进化起源自发在一个共同的祖先，所有的生命形式的DNA损伤的DNA修复机制。 自发水解胞嘧啶脱氨尿嘧啶（ U ）在DNA细胞的基因组不稳定性的来源是一个常数。这种诱变的过程，大大提高在高温下，在单链DNA 。如果不修复，这些尿嘧啶残基的C→T的过渡，这是最常见的在生物体中发生的自发突变在人类肿瘤中，常常发现产生。在大多数物种中，尿嘧啶残基从DNA由特定的尿嘧啶- DNA糖基化酶中的碱基切除修复途径除去。另外，在某些古生物体，尿嘧啶残基被淘汰嘌呤/嘧啶（ AP ）的核苷酸切口内切酶修复途径。在这里，我们主要人力AP核酸内切酶1 ， APE1 ，其特征在于底物特异性，对U的双链DNA 。 APE1裂解寡核苷酸双链含单U ? G碱基对，这个活动强烈地依赖于序列上下文和对面的基地到U反应的表观动力学参数表明，的APE1具有高亲和力的DNA含有ü但切割DNA双链在一个非常低的速度。的反应产物的MALDI -TOF-MS分析表明，一个U ·G双工APE1催化裂解产生预期的DNA片段，含有5-末端的脱氧尿苷一磷酸。 APE1在体外识别和切割双链DNA中的U的事实表明，这个属性的AP核酸内切酶的核酸外切酶III系列显着保守的古细菌对人类。我们建议碱基切除修复途径作为备份删除尿嘧啶胞嘧啶脱氨产生的核苷酸切口修复可能采取行动。 自发水解尿嘧啶胞嘧啶脱氨生成一个高度突变的DNA碱基病变。 （ 70-200 ）的基因组，每天的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶在每个人的细胞（ 1，2） 。重要的是，胞嘧啶脱氨率大大提高了在高温下，在单链DNA 。如果没有修好，尿嘧啶与腺嘌呤配对DNA复制过程中，不可避免地会产生一个C · ? →T ·过渡突变。事实上， C→T的转换，可能通过胞嘧啶损坏产生，是最经常发生在活的生物体中观察到的碱基替换（3 ? -5 ） 。此外，尿嘧啶DNA发生转储而不是TMP从核苷酸池注册，这一过程的结果在U ?一对都没有致突变性，但可能是致命的积累，对细胞基因组DNA中处于较高水平（ 6，7 ）。为了抵消尿嘧啶DNA遗传毒性，来自所有主要的生活领域（古菌，细菌和真核生物，以及某些种类的真核生物病毒）生物碱基切除修复（BER）的途径，这是介导的DNA糖基化酶。 BER发起的高度特异性和高效的N-糖基尿嘧啶DNA （ UNGs ）去除尿嘧啶尿嘧啶从DNA水解糖苷键之间的异常的基础和糖消费。的UNGs ，消费尿嘧啶的单官能性的DNA糖基化酶，和离开脱嘌呤/脱嘧啶（AP）的站点，而这又是由AP核酸内切酶裂解产生的单链的3-羟基（ 3- OH ）和5两侧的渡假磷酸脱氧核糖组（5 -DRP ） 。接着，使用的3-OH末端， DNA聚合酶启动修复合成，将定期核苷酸，以除去5- DRP组。最后，通过DNA连接酶密封件的缺口来恢复完整的双链DNA （ 8，9） 。作用于基因组的尿嘧啶DNA糖基化酶被发现在所有活的生物体属于尿嘧啶- DNA糖基化酶（ UDG ）结构的超家族，它由五个家庭（ 10，11 ） 。家庭1 UNGs ，在原核生物和真核生物中高度保守的，是最有效的酶去除尿嘧啶从DNA 。 有趣的是，某些古菌和化蛹昆虫不包含尿嘧啶DNA糖基化酶（12 ，13 ） 。同源的的几个termophilic温太古物种的全基因组序列没有透露任何五个UDG家庭，提高的问题，这些微生物是如何处理与尿嘧啶威胁到基因组稳定性（14 ，15 ） 。使用生化方法，弗里茨和同事已经确定了Mth212的蛋白同源大肠杆菌AP核酸内切酶第十届，在Methanothermobacter ： ΔH thermautotrophicus （ 12）尿嘧啶的DNA内切酶。它已被证明， Mth212可以切割AP位点和deoxyuridines dU的双链DNA的5和还拥有一个高效的3 →5核酸外切酶活性，表明这个古细菌的蛋白质是一个真正的AP核酸内切酶。此外，使用四种纯化的蛋白M. thermautotrophicus ： Mth212 ， DNA聚合酶乙， 5 -瓣的核酸内切酶， DNA连接酶连接（16）的尿嘧啶残基的DNA糖基化酶独立维修改组。有趣的是，第X个家族AP核酸内切酶比Mth212 ，其他包括大肠杆菌甲烷Mm3148马氏甲烷八叠球菌，人类AP核酸内切酶1 （ APE1 ） ，第X个，不表现出DNA尿