第四章DNA的复制学案.ppt

2、前导链合成1000-2000Nt后，滞后链开始合成； 3、冈崎片段的长度为1000-2000Nt。 1、RNA引物的作用 2、DNA聚合酶的碱基选择作用 3、DNA聚合酶的校正功能（3′- 5′外切活性） 4、修复系统的作用 六、DNA复制的保真性 1、1953年Watson和Crick提出：（ ） Ａ.多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋 Ｂ.DNA的复制是半保留的，常常形成亲本—子代双螺旋杂合链 Ｃ.三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 Ｄ.遗传物质通常是DNA而非RNA （2）、DNApolⅢ： DNA复制的主要聚合酶 1000个核苷酸/秒，连续性≥5,000个核苷酸 ①β亚基：“活动夹板”，允许全酶沿着DNA滑动。 ②DNA聚合酶III----形成不对称的二聚体，使前导链、滞后链的合成可同时进行 滞后链模板形成了一个回环。 ③回环模型 （3）大肠杆菌DNApolⅡ、IV和V 参与复制过程中的损伤修复 1、半保留半不连续复制 2、DNA复制的方向和速度 3、前导链 4、滞后链 5、冈崎片段 6、参与DNA复制的主要物质？ 7、大肠杆菌DNA聚合酶I和III的作用？ 第四章 DNA的复制 四、与DNA复制有关的物质 1、底物 2、模板 3、引发酶 4、引物 5、DNA聚合酶 2）真核生物（哺乳动物） DNApolα, polβ, polγ, polδ, polε polγ：线粒体DNA合成 polβ和polε：损伤修复 polδ:复制的主要酶，合成先导链和滞后链 polα:具有引发酶活性，合成引物 6、DNA连接酶 3′ 5′ 3′ 5′ OH P 大肠杆菌DNA连接酶：连接双链DNA上的切口，不能连接两条游离的DNA分子。 注意区别切口和缺口？ 7、解旋酶：分离双螺旋DNA的两条链 8、单链结合蛋白：稳定DNA的单链状态 9、DNA 拓扑异构酶 DNA双螺旋，在外力作用往紧缠的方向捻转时，产生的超螺旋为正超螺旋（左手超螺旋）。 负超螺旋有利于双螺旋解旋。生物体内负超螺旋稳定在5%左右。 DNA双螺旋在外力作用向松缠的方向捻转时，产生的超螺旋为负超螺旋（右手超螺旋）。 （1）、DNA 拓扑异构酶Ⅰ（E.coli） （2）、DNA 拓扑异构酶Ⅱ （E.coli） 五、细菌DNA的复制 θ复制： 环状DNA的复制方式，即从复制起点开始，双向同时进行，形成θ样中间物。 （一）复制的起始 （二）复制的延伸 （三）复制的终止 大肠杆菌复制过程 （一）复制的起始 1、oriC的结构特点（最小起始位点是245bp） 1)、4个9bp的重复序列 2)、3个13bp的重复序列 2、复制起始 （1）、DNA复制起点双链解开 ，形成复制叉。 DnaA蛋白在DNA复制的起始中起重要作用 4个9bp的重复序列----- DnaA结合位点 ① DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合。 3个13bp的重复序列---解链的位点 ②DnaA蛋白的结合促进3个13bp重复序列变性,形成开链； ③DnaB蛋白（解旋酶）分别与单链DNA结合,进一步解开DNA双链。 1、DNApolⅢ能够使DNA前导链和滞后链同时复制。 （二）、DNA链的延伸 标志：聚合酶把第一个dNTP加到引物的3-OH端 4、DNApol I 切除RNA引物，填补缺口。 DNApolⅠ： ① 5′-3′聚合活性：20个核苷酸 ② 5′-3′外切活性：RNA引物切除 5、DNA连接酶接连切口 （三）、DNA复制的终止 终止子：两个终止区域，含6个终止位点，约22bp。 终止区域一：TerE TerD TerA 终止区域二：TerF TerB TerC 每个区域只对一个方向的复制叉起作用 1、终止子序列 2、终止蛋白 Tus蛋白：与Ter位点结合，通过阻止解链酶的解链活性而终止复制。 复制体解体后，50-100bp未被复制，由修复方式填补空缺。 * * 第四章 DNA的复制 中心法则 龙生龙，凤生凤，老鼠的儿子会打洞。 一、半保留复制 二、复制起点、方向和速度 三、半不连续复制模型 四、与DNA复制有关的物质 五、细菌DNA的复制 六、DNA复制的保真性 七、复制的模型 主要内容 1953 Watson and Crick 一、半保留复制 1、定义 DNA双链解开，以每条母链为模板，合成其互补的子链，成为两段相同的子代DNA，由于每个子代DNA分子都是半旧半新，所以称之为半保留复制。 2、意义：解释了遗传的保守性。 3、实验依据 :1958 Meselson和Stahl Ma