遗传病的诊断（C11-2）.ppt.ppt

《医学遗传学》网络课程 主讲人：郭奕斌 中山医学院医学遗传学教研室 第十一章、遗传病的诊断 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 第五节、基因诊断 基因诊断又称分子诊断，是运用分子生物学技术方法（如连锁分析、分子杂交、PCR或DNA测序等)，测定特定基因的存在与否或是否有缺陷或表达水平的变化情况，从而对被检者的状态或疾病做出诊断。和传统诊断不同，基因诊断是直接从基因型推断表型，即越过产物（酶和蛋白质）直接检测基因结构而做出诊断，改变了传统的表型诊断方式，故又称逆向诊断。它不仅可对患者做出直接诊断，还可在发病前做出症状前诊断，也可对有发病风险的胎儿做出产前基因诊断。 一、基因诊断的特点 1、可越过蛋白质/酶直接检查基因的突变； 2、了解遗传异质性，有效检出携带者； 3、不受基因表达的时空限制； 4、不受取材细胞类型和发病年龄的限制； 5、针对性强，特异性高，灵敏度高，适应性强。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 二、基因诊断的条件： 1、待测基因已被定位； 2、基因的结构顺序已经弄清； 3、基因的突变性质已经阐明； 4、致病基因与遗传标记的连锁关系已经确定； 三、基因诊断材料：DNA、RNA和蛋白质。DNA用于分析基因的结构，RNA和蛋白质用于分析基因的功能。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 四、基因诊断的途径 (一)直接诊断：直接检测特定基因是否存在结构异常。通常 使用基因内探针或紧密连锁的探针，或通过PCR扩增等，以 检测特定基因有无缺失、插入、碱基置换等突变。 1、适用于已知基因异常的疾病诊断。 2、常用方法：基因内探针杂交，PCR，ARMS，PCR-RE， PCR-ASO， PCR-SSCP，PCR-DHPLC，测序。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * * ****省妇幼产前诊断提高班讲座 **** * DHPLC仪器设备 * * DHPLC筛检—示突变双峰峰形 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * DHPLC筛检—示正常单峰峰形 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * DHPLC结果 ①父亲（正常）；②母亲（携带者）；③先证者 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 插入TT的正向测序结果 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * Exon9比对（F） 正 常 杂合子 先证者 女 胎 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * (二)间接诊断：与致病基因连锁/紧密连锁的遗传标记一般会与该基因一起传递。可通过家系分析待检者是否获得该遗传标记，从而判断其是否获得致病基因。 1、用于未知基因或未知基因突变。 2、常用方法有：RFLP，STR，SNP，Amp-FLP，PCR-SSCP，PCR-DHPLC。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 3、连锁分析时应注意的事项： ① 基因与标记物之间可能发生重组； ② 所选遗传标记在人群中的杂合度的高低； ③ 最好进行单倍型分析。 单倍型（haplotype）是指一条染色体上两个或两个以上多 态位点的状态组合，它有助于区分两条同源染色体并追踪致病 基因的分离情况。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 遗传病的基因诊断方法 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 酶切分析或VNTR分析示意图 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 酶切鉴定结果 M. 100bp ladder 野生型COMP E10的PCR产物（284bp/284bp纯合子） 酶切野生型COMP E10的PCR产物（100bp和184bp） 患者COMP E10的PCR产物（254bp/284bp杂合子） 酶切患者COMP E10的PCR产物（100bp、184bp、254bp） 184 254 284 300 200 100 M 3 1 2 4 bp bp * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 针对c.262del 5突变采用的普通引物 及特异引物扩增产物的酶切电泳图 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 图50 D16S3121多态性 ①父亲；②母亲；③先证者 STRs连锁分析图 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * *