分子生物学常用技术-杂交课件.pptVIP

斑点杂交:是将被检DNA/RNA点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot，它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。膜烤干或紫外线照射以固定标本。 2．斑点杂交（Dot blot）。 （1）DNA斑点杂交： ①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。 ②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。 ③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上, 5μl(2~10μg DNA)。 ④将膜烘干，密封保存备用。 （2）RNA斑点杂交： 每个样品至多加10μg总RNA溶于5μl DEPC水， 加 5μl甲醛/SSC缓冲液（10×SSC中含6.15mol/L甲 醛），使RNA变性，然后取5-8μl点样于处理好的滤膜 上，烘干。 5．组织原位杂交（Tissue in situ hybridization） 组织原位杂交简称原位