轻松解决免疫学血液学研究中的细胞转染难题.PDFVIP

轻松解决免疫学/血液学研究中的细胞转染难题 ——基因有限公司Lonza NucleofectorTM 核转染系统 摘要：传统的脂质体转染方法和电穿孔转染方法不能有效地对免疫/血液学相关 细胞进行转染，而病毒转染方法费时费力，且存在安全风险、免疫反应等缺陷。 Lonza Nucleofector 核转染技术可以对免疫/血液学相关细胞进行高效地转染，已 经成为免疫/血液学相关细胞转染的金标准，已发表相关文献近2000 篇。 在免疫学/血液学研究领域，常常将T 细胞、B 细胞、NK 细胞、DC 、CD34+ 等原代细胞以及Jurkat、THP-1、RAW264.7 、HL60 等难转染的免疫学相关细胞 系作为细胞模型，用以进行细胞信号通路、细胞凋亡、细胞发育、细胞分化等研 究，而细胞转染是完成这些研究的必需步骤。 现阶段细胞转染的方法有病毒介导法、脂质体转染法、普通电穿孔转染技术 以及Lonza NucleofectorTM 核转染技术。病毒介导法耗时耗力，存在生物安全隐 患、病毒感染引起的不可预期的免疫反应等缺陷，极少被用于免疫/血液相关细 胞的转染。脂质体转染法和普通电转染技术对免疫/血液学相关原代细胞和细胞 系通常无效或转染效率极低，没有办法进行下游的实验。 Lonza NucleofectorTM 核转染技术首先攻克了免疫/血液相关细胞用脂质体转 染法、普通电穿孔转染法转染无效以及病毒转染方法耗时、存在安全隐患、细胞 免疫反应等的技术难关，其对原代免疫/血液细胞以及难转染的免疫学相关细胞 系都有极高的转染效率和细胞成活率。 Lonza NucleofectorTM 核转染技术作为第一个成功高效转染原代血细胞的非 病毒转染方法，目前其针对免疫细胞的转染方案是最全面和成熟的，已经成为免 疫/血液细胞转染的金标准，被广泛用于免疫/血液学研究中，已发表免疫/血液学 相关文献近2000 篇。以下是几篇经典文献的简单介绍： Julien van Grevenynghe 等[1]在其研究转录因子FOXO3a 对HIV 感染者的中 枢记忆CD4+ T 细胞（TCM cells ）活性持久性的影响的文章中，以原代TCM cells 为模型，通过Lonza Nucleofector 技术将FOXO3a 特异的siRNA 转入TCM cells 中，实现对FOXO3a 基因的高效敲除。该文章证实通过下调FOXO3a 的表达， 可以有效地延长TCM 细胞（HIV 感染）的活性。 Alina I. Marusina 等[2]在其研究AP-1 转录因子调节NK 和T 细胞中DAP10 基因表达的文章中，以原代NK 、C + + D8 T 细胞和 CD4 T 细胞作为细胞模型，通 过Nucleofector 核转染技术成功将DAP10-报告基因载体、pcDNA3 、c-Fox 过表 达载体等转入目的细胞中；其研究结果显示AP-1 转录因子能够上调NK 和T 细 N 胞中DAP10 的表达。在这这篇文章中，作者利用 ucleofector 技术实现了目的 质粒和pRL-nul Renilla 内参质粒的高效共转。 + Xingkui Xue 等[3]在其研究脐带血分化的CD34 造血干细胞和造血前体细胞 的SB 转染体系进行基因稳定转染和表达的文章中，以原代CD34+细胞作为模型， 构建了SB 转座子质粒和SB100X 转座酶表达质粒，通过Nucleofector 核转染系 统将上述两种质粒高效共转进原代CD34+细胞，并建立了高效而稳定的基因表达 体系。 Mark G. Kirchhof 等[4]在其研究Stomatin-Like Protein 2(SLP-2)对T 细胞活化 的调节作用的文章中，以Jurkat E6.1 、PBMC 、PBMC blasts 为细胞模型，通过 Nucleofector 核转染系统将SLP-2 特异的siRNA 转入细胞中，取得了非常高的转 染效率和RNA 干扰效率，成功对SLP-2 进行敲除。研究结果显示SLP-2 通过参 与维持TCR 信号