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已知基因序列的获取策略——兼谈引物设计与序列分析 黄 钢 第三军医大学遗传教研室 2006.11.1. 一、如何获取已知目的基因的序列信息 先查找其蛋白相关信息,了解该基因编码产物的基本情况与功能（） 进一步查找其核酸相关序列信息，常用数据库：Genebank、EBI、DDBJ 二、目的基因cDNA序列的获取方法 cDNA文库扫描 RT-PCR 人工合成 组织RNA的提取 在匀浆器中加工冷冻的组织 通过注射器加工冷冻的组织 在液氮中将组织研磨成粉末 在液氮中研磨组织至粉末状，细胞裂解更完全，产量比前二者多一倍。 合适的RNA提取方法加上合适的组织处理方法，才能够获得最佳的提取效果 RNA提取两要素 忌讳贪多：不能指望1ml Trizol 提取100mg以上组织，一般50mg用1mlTrizol较合适 速战速决：尽量缩短提取时间，不要完全照搬Protocol,比如匀浆后如果没有很多组织碎片的话，可以立即加入氯仿，立即离心，14000rpm离心10min,取完上清加入0.6~1体积的异丙醇，立即高速离心（14,000rpm,5min），..... 总之尽量快速！ 尽量减少RNAase污染 RNase的危害主要集中在将RNA pellet溶解在水中之后，防止RNA降解的重点应当放在组织样本的保存和RNA水溶液的保存上。 注意实验前的准备工作：各种器材的去RNAase处理与无R