第六章色谱分析导论课件.pptVIP

基本要求: 1.理解混合物中各组分在色谱柱内得到分离的原因; 2.理解柱效率的物理意义及其计算方法; 3.理解速率理论方程对实际分离的指导意义; 4.掌握分离度的计算及影响分离度的重要色谱参数. 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 色谱的发展史 1940年提出液液分配色谱法（Liquid－Liquid Partition Chromatography），即固定相是吸附在硅胶上的水，流动相是某种有机溶剂。 1941年Martin和Syngee提出用气体代替液体作流动相的可能性，11年之后James和Martin发表了从理论到实践比较完整的气液色谱方法（Gas－Liquid Chromatography），因而获得了1952年的诺贝尔化学奖。 1949年Macllean等在氧化铝中加入淀粉粘合剂制作薄层板使薄层色谱法（TLC ）得以实际应用，而在1956年Stahl开发出薄层色谱板涂布器之后，才使TLC得到广泛地应用。 1957年Golay开创了开管柱气相色谱法（Open－Tubular Column Chromatography），习惯上称为毛细管柱气相色谱法（Capillary Column Chromatography ）。 60年代末把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱，出现了高效液相色谱（HPLC） 80年代初毛细管超临界流体色谱（SFC）得到发展，但在90年代后未得到较广泛的应用。而在80年代初由Jorgenson等集前人经验而发展起来的毛细管电泳（CZE），在90年代得到广泛的发展和应用。 90年代后期集HPLC和CZE优点的毛细管电色谱得到迅速发展。 21世纪色谱科学将在生命科学等前沿科学领域发挥不可代替的重要作用。  1. 按固定相外形分： 柱色谱（填充柱、空心柱）、平板色谱（薄层色谱和纸色谱)。 2. 按组份在固定相上的分离机理分： 吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同； 分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同； 离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换剂）上的亲和力不同； 凝胶色谱（尺寸排阻色谱）:不同尺寸分子在固定相上的渗透作用。 由于时间为色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关，因此有时需用保留体积来表示保留值。 d. 死体积V0：色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间空隙和检测器间隙的总和。勿略后两项可得到： 其中，Fco为柱出口的载气流速（mL/min)，其值为： F0-检测器出口流速；Tr-室温；Tc-柱温；p0-大气压；pw-室温时水蒸汽压。 ＊注:对液相色谱Fco为柱内流动相体积流速（mL/min)，不需要进行校正。 注意：r2,1只与柱温和固定相性质有关，而与柱内径、柱长L、填充情况及流动相流速无关，因此，在色谱分析中，尤其是GC中广泛用于定性的依据！ 具体做法：固定一个色谱峰为标准s，然后再求其它峰 i 对标准峰的相对保留值，此时以? 表示： ? 1, 又称选择因子(Selectivity factor)。 色谱流出曲线的意义： 色谱峰数=样品中单组份的最少个数； 色谱保留值——定性依据； 色谱峰高或面积——定量依据； 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。 一、描述分配过程的参数 1、 分配系数(Distribution constant, K)： 描述组份在固定相和流动相间的分配过程或吸附-脱附过程的参数，称为分配系数。 K 只与固定相和温度有关，与两相体积、柱管特性和所用仪器无关。 分配比 k 的求算： 1）组分滞留因子： 2）又， 3）因此， 注意：K 或 k 反映的是某一组分在两相间的分配；而 ? 是反映两组分间的分离情况！当两组分 K 或 k 相同时，? =1 时，两组分不能分开；当两组分 K 或 k 相差越大时，? 越大，分离得越好。 塔板理论假定： 1）塔板之间不连续； 2）塔板之间无分子扩散； 3）组分在各塔板内两相间的分配瞬间达至平衡，达一次平衡所需柱长为理论塔板高度H； 4）某组分在所有塔板上的分配系数相同； 5）流动相以不连续方式加入，即以一个一个的塔板体积加入。 当塔板数n较少时，组分在柱内达分配平衡的次数较少，流出曲线呈峰形，但不对称；当塔板数n50时，峰形接近正态分布。 由塔板理论假设导引出一个描述色谱流出曲线的数学表示式： 式中 c :色谱流出曲线上任意一点样品的浓度； n :理论塔板数； m :溶质的质量； VR :溶质的保留体积，即从进样到色谱峰极