紫外分光光度法测定溶血率的研究.docVIP

紫外分光光度法测定溶血率的研究 　　【摘 要】 目的：对紫外分光光度法测定吸收度计算溶血率时波长的选择进行探讨研究。方法：参考《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅧ B中药注射剂安全性检查法应用指导原则和中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则进行溶血试验的研究。结果： 兔血红细胞破裂后在541nm和576nm处有最大吸收；同一供试品分别采用541mm和576nm测定溶血率，结果无显著性差异。结论：当样品本身在541nm或576nm处有吸收，干扰溶血率计算时可选择另一不干扰波长测定溶血率。 　　【关键词】 紫外分光光度法；溶血率；波长 　　【中图分类号】R927.11 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）24-0031-03 　　Abstract：Objective To study the selection of wavelength when UV is used on the hemolytic rate. Methods According to the Guiding Principles of safety tests on traditional Chinese medicine injection in Annex XVIII B， Chinese Pharmacopoeia， 2010 Edition 1， and Technical Guidelines of studies on the irritability and hemolytic activity of traditional Chinese medicine and natural medicine. Results When rabbit red blood cells rupture， there is maximum absorption on 541 nm and 576 nm. There is no significant difference when a same sample was determined on 541 nm or 576 nm and calculate hemolytic rate. Conclusion When a sample have absoption on 541 nm or 576 nm and it interfere in hemolytic rate，we can choose another wavelength to determine the hemolytic rate. 　　Keywords：Ultraviolet Spectrophotometry；Hemolytic Rate； Wavelength 　　溶血与凝聚是灭菌制剂安全性质量控制指标之一，随着国家对注射剂安全性的重视程度日渐增加，尤其是中药注射剂，溶血与凝聚已成为安全性必检项目之一。《中国药典》2005年版、2010年版均收载了该方法，但在结果判断中，药典一直以肉眼目测作为样品是否溶血的结果判断方法。在“中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则”中收载了紫外分光光度法测定吸收度计算溶血率以判断样品是否溶血的方法，该指导原则中仅收载了545nm作为测定波长，但有部分注射剂，尤其是中药注射剂可能本身在545nm有吸收，可造成对样品溶血率测定的干扰。因此，笔者对紫外分光光度法测定溶血率时波长的选择进行了以下研究。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 SUB28恒温水浴（Grant Instrument Ltd. England）；TLM16M型高速冷冻离心机（湘仪离心机厂）；LD4-2离心机（北京医用离心机厂）；UV-2550 PC型紫外分光光度计（岛津仪器）；DHG-9075 A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）。 　　1.2 材料 血塞通注射液（批号黑龙江多多药业有限责任公司）。氯化钠注射液（批号：A100205p2，昆明南疆制药有限公司）。 　　1.3 实验动物 普通级日本大耳白兔由昆明医学院实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK[滇]2005-0008，发证机关：云南省科学技术厅；实验动物使用许可证：SYXK（滇）2005―0005，发证机关：云南省科学技术厅。 　　2 方法与结果 　　2.1 兔血红细胞溶血后最大吸收波长的测定 　　2.1.1 2%红细胞混悬液的配制[1] 兔心脏取血4mL，用玻璃珠去纤维蛋白原使成脱纤血，加氯化钠注射液，摇匀，离心15min（1000r/min），弃上清液，沉淀的的红细胞用氯化钠注射液同上法洗涤3次，至上清液不呈红色，取沉淀红细胞1mL，加氯化钠注射液稀释至50mL，混匀，