24D和BSA偶联物结合比的测定方法研究.pdfVIP

第三届环境模拟与污染控制学术研讨会论文 2．4一D和BsA偶联物结合比的测定方法研究 余若祯何苗施汉昌钱易 清华大学环境模拟与污染控制国家联合重点实验室 ～、课题背景 从2001年9月1日开始，我国执行的新的《生活饮用水水质卫生规范》的非常规检测项 目增加了多个农药项目，其中2，4一D的检测限值为O．03 m∥L。同时，2，4．D还是68种EDcs 之一。《生活饮用水检测规范(2001)》中2，4．D检测的参考方法为气相色谱法。气相色曾法 分析水中的2，4．D，需要经过复杂的萃取、衍生(酯化)前处理，检测耗时长、费用高、设备 费用高。免疫检测不需要对样品进行前处理，检测耗时短、费用低、设备费用相对较低。因 此开展2，4-D的免疫检测技术研究具有应用价值。免疫检测将半抗原和载体蛋白合成免疫原 是免疫检测技术研究的关键内容。确定半抗原(2，4．D)和载体蛋白(BsA)偶联物的结合比 可以初步评价合成免疫原的性能。 二、研究方法 根据朗伯．比尔定律一=￡C上，吸光度具有加和性，即混合物的总吸光度等于混合物中个 组分的吸光度之和。所以，可采用解联立方程组的方法求得混合物中个组分的含量。BsA在 尔吸光系数。分别测定偶联物在上述两个波长条件下的吸光度值，联立方程求解，可以计锋 出偶联物中BSA和2，4．D所占的比例，从而得到偶联物的结合比。 s篇。．。c目∞+￡；ij‰c：．。一D=z；裟。。 (1) s熟。。c。+￡盖：急c2+。=箴戮． (2) 图2．1 BsA的紫外吸收标准工作曲线 图2—2 2，4-D的紫外吸收标准工作曲线 试验测定分别绘制2，4．D和BsA的紫外吸收标准工作曲线(如图2．】’图2．2)，汁算得 到278珊和282．8nm波长下2，4．D和BSA的摩尔吸光系数，得到二元一次方程组： 39．083c％+1．507lc2．4-。=爿；篇。 (1) 35．771ck+l8653G。一D=儡 (2) 一∞盯一 第三届环境模拟与污染控制学术研讨会论文 别是偶联物溶液在27811lll和282．8nm下的吸光度。 三、结果与讨论 1结果 采用上述二元一次方程组计算多次偶联试验产物的结合比，见表3—1 表3．1 EDc偶联试验产物紫外吸光度数据及结台比计算表 样品编号 波长(nm) 结合比 偶联物吸光度 CBsA(肛M) C2‘D(pM) I t 278．O 0．5500 5949 11．78 505 282．8 0．5323 2 270 0．3358 6130 6．24 9．78 2828 0．3370 3 278．0 00 1767 1189 1伽70 210 282，8 1．0237 4 278．O 0．7330 19920 1107 18．00 282．8 0．7677 5 278．O 0．5202 1695 6．772 25，03 2828 0、5585 2．讨论 (1)相关文献指出，半抗原和载体蛋白的最大紫外吸收峰互不干扰的情况下，可以采用 紫外吸收光谱法测定偶联物的结合比。当半抗原和载体蛋白的紫外吸收峰接近或者重叠的情 况下，一般采用nmS法测定结合比。但是TN