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发酵工程学科的进展 ——第四冼全国发酵工程学术讨论会论文集 一种提高乙醇产量的新方法基于酵母 表面展示的新系统 祁庚生 (山东大学微生协技术国家重点实验室) 前言 由于目前石油资源储备的目益下降，能源问题已成为困扰当今世界各国的重要问 题。而目前令人注目的是，从微生物发酵得到的乙醇水溶液中提取乙醇作为石化产品的 代用品已提到议事日程上。随着石油价格不断飙升，酒精燃料以其无可比拟的优势开始 崭露头角。巴西已将使用纯乙醇作为燃料定为国策，并加以推广。目前，巴西加油站卖 出的汽油是掺有20％酒精的汽油。也许．酒精燃料终将成为汽油和柴油等传统能源的替 代品，成为21世纪主要能源。 以淀粉质或糖蜜为原料通过生物发酵法生产酒精。至今已有百余年的历史。但由于 受酵母菌株本身性能和生产技术的制约，而使目前酒精工厂的原料淀粉利用率维持在 88％左右。因此提高酒精产量，降低生产成本成为各生产酒精企业梦寐以求的事。剩余 淀粉的利用是一个比较重要的问题。 的舍有6、7、8个甚至更多葡萄糖单元，彼此间通过a一1，4葡萄糖苷键连接而成的环状低 们分别是由6、7、8个葡萄糖单体在Cl和c4上连接而成的环状低聚糖。其中B一环糊精 的产率最高，应用也最广泛。环糊精由于具有外亲水内疏水的结构特性，可以与某些有 机分子形成包和物。包和作用可以改变客体分子溶解度、物理化学性质、药效等。正因 为环糊精的这种特性，现在环糊精已在农业、医药、化妆品行业有着极为广泛的应用。 在生产环糊精的过程中添加乙醇可以提 高环糊精的产量，这可能与环糊精分子与乙醇 分子形成包和物有关。同样，在生产乙醇的过 程中添加环糊精是否可以提高乙醇产量呢? 环糊精糖基转移酶能够利用淀粉产生环糊精 和葡萄糖和麦芽糖等，酵母则能利用这些糖来 生产酒精，能否利用这个性质提高环糊精的产 量呢?我们通过建立一个展示系统来实现这 个目的(图1)。 祁庆生：一种提高乙醇产量的新方法 93 首先，我们建立了一个酵母表面表达系统，在这个系统中，环糊精糖基转移酶固定表 达在酵母细胞表面，成为固定化酶。固定化有环糊精糖基转移酶的酵母细胞能够直接利 用淀粉作为底物生产环糊精，省略了淀粉的糖化水解过程；同时，在环糊精生产过程中产 生的葡萄糖和麦芽糖能够被酵母利用，从而解除了葡萄糖和麦芽糖对环糊精糖基转移酶 的抑制作用，使环糊精的产量从20mg／ml提高到25mg／ml。 固定化酶的最适酶反应温度还是50℃，但酶在高温和低温的稳定性增加；最适酶反 应pH值也从6变到了9。尤其重要的是，环糊精糖基转移酶的产物专一性增加了，B环 糊精的比例从64％增到了75“。在50℃，pH9的条件下带有酶的工程化酵母酶活达到 1．88个单位每毫升培养细胞(一个单位的酶活定义为每分钟转化1毫摩尔0环糊精的酶 量)。在酵母培养条件下，即在30℃，pH7的条件下，酶活较低，但经过一段时间后产物总 量要比同等量的纯酶产生的环糊精要高，而且产物分离时只需离心去除酵母菌体，不需 要去除酶，减少了生产步骤。 其次，我们在研究中发现，表面表达的酵母似乎能够在乙醇存在的条件下更好的生 糊精对酵母酒精耐受性的影响，通过HPLC测定酵母的乙醇产量、葡萄糖消耗速度研究 环糊精对提高酵母乙醇产量的影响。实验证明，环糊精可以提高菌体的酒精耐受性，降 低高浓度乙醇对酵母的毒害作用，在酵母发酵过程中可以显著提高酵母的乙醇产量。这 对研究乙醇的生产和酵母乙醇耐受性的机理具有重要意义。 参考文献 of CGTasealsoira· P．，Qi，q-(2006)productioncyclodextrinsbyengineeredmay [1]An，Yanpeng．．Wang proveethanol production．Appl．Environ．Microbi01．Submitted．