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一种新型芯片毛细管电泳检测装置· 王辉1，白吉玲2王利2林炳承一+ 1．中科院大连化学物理研究所，生化分离分析中心 2．中科院大连化学物理研究所，分子反应动力学国家重点实验室 前言： 九十年代初，Manz等人提出了“微全分析系统”(Micro-total analysiSsystem，u—TAS， 其核心为微流控芯片)的概念，并利用以湿法刻蚀为主的微细加工技术成功地在玻璃基片上 制作出微通道1。由于毛细管电泳技术以电渗流为主要驱动力，通过电压切换即可控制微通道 内液体的流动，不需要泵、阀等机械装置，因此成为微流控芯片研究中的核心技术。以毛细 管电泳分离技术为基础的各种微流控芯片装置一经出现，就引起了广泛的重视并得到快速的 发展，其功能也得到了进一步拓展和集成。特别是近几年来，微流控芯片装置已由单纯的分 离分析装置发展成为包括PCR扩增(聚合酶链反应)2混合3、电泳分离、检测及柱后衍生4 等在内的多功能集成，即所谓的“芯片实验室”(Lab—on-achip)。“芯片实验室”的出现使 得实验室中原本不连续的分析过程得以在同一个芯片上连续、自动的完成，提高了分析结果 的重现性、缩短了时间，降低了成本。同时，由于芯片微通道易于阵列化，可以在几平方厘 米的基片上蚀刻JL十甚至上百条电泳通道5，大大提高了芯片上的样品信息量6，因此在大规 模的基因测序和药物筛选等方面具有传统毛细管电泳所无法比拟的优势7。 本研究中根据激光共聚焦原理自组装了芯片毛细管电泳一激光诱导荧光检测装置，以体 积较小、价格相对低廉的国产半导体激光器为光源，通过自行设计的软件对其进行频率、脉 宽调制，以符合取样平均器参数选择需要，进行弱信号检测。在此基础上，以简单的十字型 毛细管电泳芯片为平台，对新搭建的仪器进行了氨基酸的芯片毛细管电泳分析。 仪器装置： 本实验装置是对自组装的芯片毛细管电泳一激光诱导荧光装置进行改进的基础上搭建起 来的，其原理如图l所示8。原来体积庞大、价格昂贵的的染料激光器由体积较小、价格低廉 nm，约70 的半导体激光器(532 mw，连续激光器，北京波前伟业科技公司)取代，通过自行 研制的软件对半导体激光器进行调制，使其发出的激光频率、脉宽均可调。根据激光共聚焦 的原理，由调制半导体激光器发出的高频脉冲激光进入改装后的荧光显微镜(N一400M，宁波 永新显微镜厂)中，通过双色分束镜(535nm以下反射，545nm以上透过)，进入显微镜的聚 焦物镜内(改装后焦距约为2．5哪，数值孔径约为0．7)，聚焦在毛细管电泳芯片的分离通道 上，光斑直径约有0．15mm。通道内样品发出的荧光由同一物镜收集后，通过半反半透镜，透 镜聚焦、空间滤波(直径约为1mm的圆孔)，以及单色片滤光(570DFl0，美国OmegaOptical AD转换进入计算机。HW350A激光实验控制系统(自行研制)，可完成对激光器，平均器，AD 转换等触发，延迟，信号采集及数据处理等多种功能。4个独立的高压模块(营口，高新电子 公司)通过一组高压继电器(美国，CRYDOM)由计算机控制高压输出，根据进样及分离的 需要可以同时对芯片上的4个储液池施加不同的电压，并能够在约几十毫秒的时间内从进样 的加电模式切换到分离的加电模式。芯片放置在显微镜的载物台上。 结果与讨论： ‘本文系国家自然科学面上基金、t．点基金、重大基金和国际合作基金资助项目 “通讯联系人tEmail：bclin逼》ms．dicp．ac．cn 迄今为止，同类装置多采用氩离子激光器做激发光源，用斩波器调制激光，由锁相放大 器获取信号。由于氩离子激光器体积较大、价格较贵、操作复杂且维持费用高，因此本实验 中利用小型的半导体激光器来代替氩离子激光器。由于半导体激光器发出的是连续激光，要 想其能与Boxcar检测技术相匹配，通常需要对激光进行斩波。我们利用自行研制的软件对半 导体激光器进行调制，使其能够发出重复频率在1—500Hz之间的脉冲激光，以满足Boxcar 检测需要。Boxcar测量时，常要对各种参数(包括取样门宽、取样延迟等)进行选择，以期 得到最佳恢复波形。根据采样定理，采样次数越多，信噪比越好，受激光及系统所限，我们 通常选500 Hz