2016-2017学年人教版选修一 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 学案.docVIP

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 筛选菌株的思路及统计菌落数目的方法 筛选菌株的思路 自然界中的目的菌株的筛选： （1）依据：根据它对 的要求，到相应的环境中去寻找。 （2）实例：PCR技术过程中用到的耐高温的 ，就是从热泉中筛选出来的tap细菌中提取出来的。 2、实验室中的目的菌株的筛选 （1）原理：人为提供有利于 生长条件（包括营养、温度、PH等），同时 的生长。 （2）方法：利用选择培养基分离 ①选择培养基： ②实例： 加减成份 加青霉素等抗生素 加高浓度食盐水 不加氮源（无氮培养基） 不加碳源（无碳培养基） 以尿素为唯一氮源 以纤维素为唯一碳源 分离菌种 统计菌落数目 常用方法： （1）原理： ①当样品的 足表面够高时，培养基表面生长出 ，来源于稀释培养液中的 。 ②通过统计平板上的 来推测样品中大约有的活菌数。 （2）计算公式： =（C÷V）×M C：代表某一稀释度下平板上生长的 M：代表涂布平板时所用的 （ml）， M代表 （3）注意事项： ①为了保证结果的准确，每个稀释度，一般设置 ，选择菌落在30—300的平板进行计数，并取 [来源:Zxxk.Com] ②统计的菌落数往往要比活菌的实际数目 ，原因是当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是 ，因此，统计结果一般用 ，而不用 ③设置对照：主要目的是排除实验组中 对实验结果的干扰，提高实验结果的可信度。 2、其他方法： 直接计数 3、两种常用的计数方法比较 间接计数 [来源:学科网] 主要用具 显微镜、 培养基 计数依据 菌株本身 培养基上 优点 计数方便、操作简单 计数都是活菌 缺点 死菌活菌都计算在内 操作复杂，有一定误差 计算公式 实验设计及操作提示 （一）实验设计 1、土壤取样：（1）土壤要求：富含 ，PH接近中性且潮湿（2）取样要求：距离地面 的土壤层。 2、制备培养基：准备 ， 制备9个平板培养基。 3、样品稀释：（1）稀释原因：样品稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目。（2）稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得的菌落数在 ，便于计数。（3）稀释倍数：测定土壤中 的 的数量，一般选用 ；测定 的数量，一般选用 ；测定真菌的数量，一般选用 。 4、涂布平板：（1）在上述培养基中的9个平板地面，每三个一组分别记号104、105和106倍三种稀释液。 （2） 用三支1ml无菌吸管分别从104、105和106倍的三管土壤稀释液中吸取0.1ml 对号放入已写好稀释度的平板，用无菌涂布器在培养基表面上轻轻涂布均匀。 5、培养观察：（1）培养：不同种类微生物，需要不同的培养 和培养 。 （2）观察：每隔24小时统计一次菌落数目，最后选取 时的记录为结果。 6、计数：当菌落数目稳定时，取同一稀释度下的3个平板计数，