人AQP5真核表达质粒的构建及其在胃癌细胞中的表达.pdfVIP

重庆医学 2013年 271第 42卷第 4期 407 · 基础研究 · 人 AQP5真核表达质粒的构建及其在 胃癌细胞 中的表达 黄永红 ，徐方云。，吕农华 (1．南昌大学第一附属医院消化 内科 ，南昌330006； 2．南昌大学基础医学院病理生理教研室，南昌330006) 摘 要：目的 构建人pcDNA3．1一AQP5／myc—His真核表达质粒，观察水通道蛋白5(AQP5)基因在 胃癌AGS细胞中的稳定 表达。方法 采用基 因重组技术将人 AQP5cDNA插入真核表达载体 pcDNA3．1／myc—His，构建人 pcDNA3．1-AQP5／myc—His 真核表达质粒。脂质体介导空载体 pcDNA3．1／myc—His和表达质粒 pcDNA3．1一AQP5／myc—His分别转染人 胃癌AGS细胞株， G418筛选 ，挑取阳性克隆，扩大培养 ，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋 白质印迹法(WesternBlot)分别检测 AQP5mRNA和 蛋 白表达。结果 双酶切和基因测序结果均证实人pcDNA3．1-AQP5／myc—His真核表达质粒构建成功。AQP5转染组与空白对 照组、空载体组 比较 ，AQP5mRNA表达显著增加 (P0．05)，AQP5蛋 白表达显著上调 (P0．05)。结论 成功构建人 AQP5真 核表达质粒并获得稳定表达 AQP5基 因的胃癌 AGS细胞系，为进一步研究AQP5蛋 白对 胃癌恶性表型的影响奠定实验基础 。 关键 词 ：胃肿 瘤；水通道蛋 白质 5；转染 doi：10．3969／j．issn．1671-8348．2013．O4．O18 文献标识码 ：A 文章编号：1671-8348(2013)04—0407—03 ConstructionofeukaryoticexpressionplasmidforhumanAQP5anditsexpressioningastriccelllineAGS H uangYonghong ．X Fangyun ，L N onghua1G (1．DepartmentofG。s￡r08￡Pr0Z0g ，theFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity， Nanchang，Jiangxi330006，China；2．DepartmentofP口 0户 s0Z0g3，，theBasicMedicalCollegeof NanchangUniversity，Nanchang，Jiangxi330006，China) Abstract：Objective ToconstructandidentifyhumanpcDNA3．1一AQP5／myc—Hiseukaryoticexpressionplasmidandtoob— servetheexpressionofAQP5ingastriccancercelllineAGS．Methods HumanAQP5cDNAwasclonedintoeukaryoticexpression vectorofpcDNA3．1／myc—HistoconstructpcDNA3．1-AQP5／myc—Hisplasmid．Therecombinedeukaryoticexpressionplasmid pcDNA3．1-AQP5／myc—HisandemptyvectorplasmidpcDNA3．1／myc—HisweretransfectedintogastriccancercelllineAGSbyLi— pofectamine2000，respectively．ThepositivecolonieswereselectedbyG418．ThemRNA andproteinexpressionofAQP5wereas— sessedbyRT—PCR andWesternblot，respectively．Results Eukaryoticexpre