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江苏农业科学 2012年第40卷第 12期 一 41一 宋 凯．人CD9蛋白在SP2／0细胞中的表达与检测[J]．江苏农业科学，2012，40(12)：42—43 人 CD9蛋白在 SP2／0细胞 中的表达与检测 宋 凯 (徐州生物工程职业衰术学院，江苏徐州221006) 摘要：CD9被证明是精卵质膜相互作用中一种重要的蛋 白。通过构建 CD9基因真核表达载体，在293GP细胞中 包装成假病毒，并成功感染SP2／0细胞，利用逆转录病毒转染效率高，外源基因表达稳定等优点，在哺乳动物细胞中表 达人 CD9蛋白，并分别采用RT—PCR法、Western杂交法、流式细胞仪法检测重组细胞中CD9的表达情况，经检测 CD9基因在SP2／0重组细胞中正常表达。 关键词：人CD9蛋 白质；SP2／O细胞 ；蛋白表达 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：10o2—1302(2012)12—0041—03 CD9／P24是一种存在于包括卵母细胞等多种细胞的浆 1 材料与方法 膜中的糖蛋 白，相对分子质量为24ku。人 CD9基因位于人 第十二号染色体 12p13．3区…，人 CD9蛋 白由228个氨基酸 1．1 材料 组成 ，分子中有4个疏水区，往返4次穿过细胞膜 ，与其他多 CO：培养箱(SanYo公司产品)；CK 41型倒置相差显微 种同源性膜蛋白共同组成4次跨膜蛋 白(tetraspanin)超家 镜(Olympas公司产品)；3K30型高速冷冻离心机 (Sigma公司 族 。CID是精卵质膜相互作用中的一种重要蛋 白。试验 产品)；Sigmal一13型高速离心机 (LabwayScience公司产 表明CD9参与调节小 鼠受精过程 -6]。CD9功能区包括大 品)；BeckmanDU一640型紫外分光光度计 (Beckman公司产 的胞外环 (EC2)，在 EC2区域中有 1个特定的氨基酸序列 品)；水平板式电泳仪 (Bio—Rad公司产品)；紫外透射／凝胶 SFQ，这个序列被认为是 CD9在精卵融合 中的激活位点 。 成像仪 (Vilber—Lourmat公司产品)；BeckmanCounter流式 Zhu等指出，CD9分子中细胞外大环SFQ序列可能是活性位 细胞仪 (Beckman公司产品)；一80℃低温冰箱 (SanYo公司 点，调节小鼠配子融合 。CD9参与精卵相互作用的机制并 产品)；PCR仪 (Eppendoff公司产品)；FITC标记的羊抗 鼠 不十分清楚。CD9有可能通过与卵子膜中其他蛋 白质 的相 IgG(Sigma公司产品)；胎牛血清 (四季青生物制品有限公司 互作用发挥作用。CD9能与整合素如a3fll和ot6fll结合，可 产品)；胰蛋 白酶 (Sigma公司产品)；293GP细胞、SP2／0细 能是整合素的辅助因子。由于CD9在人类精卵融合中通过 胞、pVSVg载体 (笔者所在实验室保存)；重组逆转录病毒载 整合素的作用及其机制与动物的研究结果不一致 ，最近提出 体pBABE—puro—CD9(笔者所在实验室构建)。 一 种新假设” ：妊娠特异性糖蛋白(PSG)家族成员PSG17 1．2 方法 是CD9的配体。 1．2．1 pBabepuro—CD9、pVsvg质粒的大提 聚乙二醇法大 提质粒，一20℃贮存备用。