人肺腺癌细胞SPCA1与人正常肺WI38对纳米颗粒吞噬作用的比较研究.pdfVIP

2005年上海市颗粒学会年会论文集 人肺腺癌细胞SPC-A-1与人正常肺Wl-38对纳米颗 粒吞噬作用的比较研究 马勇杰李红许凯黎古宏晨 摘要：目的探讨癌细胞及正常细胞对氨基硅烷纳米Fe30。颗粒的吞噬行为的特点及吞噬能力的差异。方法分别培养肺 经传代培养10代后生长良好，且在第7代仍然能观察到细胞内分布的颗粒，颗粒分散良好，没有出现团聚现象。结论在 分散良好，没有出现团聚现象，这有利于热(化)疗的进行。 关键词：吞噬：癌细胞；氨基硅烷；四氧化三铁；纳米颗粒 热疗是利用热能杀灭癌细胞和肿瘤组织的一种物理疗法，由于没有化疗和放疗的毒性累积的副作用， 能够反复施行，并且能够配合化疗和放疗起到增效或增敏的作用，因此，热疗在恶性肿瘤综合治疗方面的 价值越来越受到临床重视u‘8。。然而，如何使肿瘤组织均匀升温至所需治疗温度而又不损伤正常组织是各 种热疗方法中不可避免的共同技术难题。近年来，人们提出了细胞内热疗技术[9do】，拟通过体外交变磁场 的作用促使进入细胞内的纳米磁粒产热而杀伤肿瘤细胞。这需要足够量的纳米颗粒进入肿瘤细胞。为了增 加进入肿瘤细胞的纳米颗粒的数量及效率，我们采用小分子量的硅烷修饰纳米颗粒，一方面避免了纳米颗 粒体积的增大，另一方面利用硅烷表面的带正电荷得氨基增加了对细胞膜的静电吸附作用。这大大提高了纳 米颗粒进入细胞的效率，为今后肿瘤诊断及治疗奠定实验研究基础。 材料与方法 1纳米磁性材料的制备及修饰 采用共沉淀法制备Fe304纳米颗粒，经氨基硅烷包被修饰后超声、离心，取上清悬浮液备用[111。经 透射电镜(TEM，Philip)测定其粒径约10～20nm。 2细胞培养及超微结构检测 表面的纳米Fe304。分别取培养不同时间的细胞，按制作TEM样品的常规方法处理后作超微结构观察。另 在细胞内的分布状态。 基金项目： 上海市纳米专项(0249nm07t)，国家863项目(2002AA302210) 作者单位： 1．上海交通大学纳米科学与技术工程中心(上海200030)；2．上海交通大学肿瘤研究所分子诊断实验室(上海 200032) 通讯作者： 古宏晨，教授，博导。hcgu@sjtu．edu．an 作者简介： 马勇杰，男，硕士 2005年上海市颗粒学会年会论文集 221 结果 胞仍生长良好，未见细胞形态的明显改变。TEM观察到第7代细胞质内仍然分布少量氨基硅烷纳米Fe304， 且其仍然保持着与在培养液中相同的均匀分散的状态，未出现团聚现象(见图6)。 一：细胞内的氨基硅烷纳米颗粒；n：细胞核；P：吞噬泡；L：溶酶体 图6．吞噬了纳米Fe304的SPC—A一1传7 米Fe304(×6500)；图5．纳米F。304位于吞噬泡(P)及溶酶体(L)内(×20000)I 代后仍分散均匀(×20000) 讨论 222 2005年上海市颗粒学会年会论文集 新的氨基硅烷磁流体能被前列腺癌细胞吞噬，很难被正常前列腺细胞吞噬。癌细胞与正常细胞吞噬行为的 不同主要是由于恶性增殖细胞由于分裂比较旺盛，对纳米粒子的摄入相应增加造成的。为了增加靶细胞对 纳米颗粒的内化效率，可以在磁粒表面连接特异性配体，甚至单抗来增加受体介导的内吞[14-16]。但是， 连接抗体后的总体尺寸的增大及免疫原性会影响纳米颗粒通过生物膜的扩散作用，从而降低了内化效率。 氨基硅烷分子量比较小，纳米磁粒经其修饰后的粒径几乎不发生大的改变。而且，氨基的正电荷增加了纳 米颗粒与生物膜的静电吸引作用。这大大有利于提高靶细胞对纳米颗粒的内化效率。与正常细胞的特异性 的内化过程不同，肿瘤细胞非特异性的内吞机制并不清楚。一般认为粒子进入细胞的方式有三种：胞饮作 用、胞吞作用及吞噬作用【17 J。进入细胞的纳米Fe304成簇分布，且位于吞噬泡及溶酶体内，可以认为是通 过吞噬作用进入细胞的。首先，由于静电相互作用，氨基硅烷纳米颗粒在靶细胞表面非特异性吸